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小鹅瘟病毒PCR检测试剂盒说明书

简要描述:小鹅瘟病毒PCR检测试剂盒说明书样本前处理:
取适量病料心、肝、肠等组织,于灭菌研钵充分研磨,用PBS按照1:3体积稀释成均匀乳剂,经10 000rpm离心3 min。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2022-04-07
  • 访  问  量:342
详情介绍

小鹅瘟病毒PCR检测试剂盒说明书

【用途】 用于小鹅瘟病毒核酸的检测。

试剂

编号

20T

50T

保存

裂解液

4mL

10mL

室温

A

无水乙醇

4mL

10mL

室温

去蛋白漂洗液

12mL

28mL

室温

洗涤液

32mL

77mL

室温

洗脱液

2mL

5mL

室温

蛋白酶K

0.2mL

0.5mL

-20

B

PCR反应液

200μL

500μL

-20

引物

40μL

100μL

-20

阳性对照

30μL

30μL

-20

阴性对照

300μL

300μL

-20

DL2000 DNA Marker

20μL

50μL

-20

小鹅瘟病毒PCR检测试剂盒说明书操作步骤】

1.样本前处理及核酸提取  

样本前处理

取适量病料心、肝、肠等组织,于灭菌研钵充分研磨,用PBS按照13体积稀释成均匀乳剂,10 000rpm离心3 min

核酸提取:

(1)取200μL上述样本离心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL离心管,然后加入200μL裂解液,剧烈振荡。(蛋白酶K开盖使用后建议存于2-8)混匀5~10秒。

(2)56℃温浴10分钟。

(3)在上述离心管中加入200μL无水乙醇,充分振荡混匀510秒。

(4)将步骤3中混匀的液体转移至一只套有收集管的纯化柱上,10 000rpm离心1分钟,弃去套管内液体。

(5)将500μL去蛋白漂洗液加入纯化柱上,10 000rpm离心1分钟,并弃去套管内液体。

(6)将700μL洗涤液加入纯化柱上,10 000rpm离心1分钟,并弃去套管内液体。

(7)可选:重复步骤(6)。

(8)再将纯化柱放回接液管上,13 000rpm离心1分钟。

(9)将纯化柱移到一只干净的1.5mL离心管中。

(10)向离心柱内加50μL洗脱液,室温静置1分钟后12 000rpm离心1分钟,弃纯化柱,离心管内液体中含有基因组DNA。提纯的基因组DNA如果不立即使用,请保存于-20℃。

2. PCR加样体系(总体系20 μL将下列试剂加入PCR反应管中。

PCR反应液

引物

10μL

2.0μL

模   板

8μL

(注:阴、阳性对照设立,由试剂盒提供的标准品直接替换“模板"即可。)

3. 反应程序

           94预变性

 5min

           94变性

 30s

           51退火

 30s   34个循环

           72延伸

 30s  

           72延伸             6min

           4

5min

4.

配制1%琼脂糖凝胶,取PCR产物5uL,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加3μl DL2000 DNA Marker,在120v-130v 电压下,1×TAE液中电泳15-20min,在紫外成像仪下观察结果。

【结果判定】

   372b左右位置出现扩增带,核酸检测为阳性(如图)。

   372b左右位置未出现扩增带,核酸检测为阴性                        

                         


1.B使用之前请*溶解并离心数秒后使用,蛋白酶K开盖使用后建议保存于2-8℃。

2 反复冻融试剂将降低检测灵敏度,尽量减少反复冻融

3 为避免样本间的交叉污染,模板最后加,加模板时先加阴性对照,再加检测样品,最后加阳性对照,有条件的实验室加模板的移液器应与加其它组份的移液器分开。

4 上机前注意检查确保反应混合液内无气泡,且反应管盖紧。

【生产企业】  

企业名称:山东绿都生物科技有限公司

生产地址:山东省滨州市经济开发区黄河二路169号绿都生物工程高科技园

【有效期】本制品有效期为1年,生产日期见包装内侧。

仅供兽医诊断使用


长期提供原核、真核蛋白表达构建服务

长期 提供抗原偶联、 HRP、生物素、糖基化、亲和素、FITC等偶联标记多肽、抗体、抗原、蛋白等服务


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