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0543-3202800猪蓝耳病毒抗体ELISA检测试剂盒使用说明书
Service manual of ELISA Kit for PRRS Virus antibody
【产品简介】猪蓝耳病(PRRS)是一种高致病率、高死亡率的病毒病,给国内养猪业造成巨大的损失。在免疫预防工作中,接种了疫苗后,由于多种因素可能导致猪不产生或产生低水平蓝耳病病毒抗体。
本试剂盒采用酶联免疫吸附试验检测猪血清中PRRSV抗体,用于免疫疫苗后抗体动态水平监测,指导免疫预防工作,评估猪场蓝耳病免疫状况,也可用于蓝耳病的流行病学调查。
【猪蓝耳病毒抗体ELISA检测试剂盒使用说明书产品内容】
试剂盒主要成分 | 数 量 |
抗原包被板(PRRSV) | 96T×1 |
阳性对照 | 1ml×1 |
阴性对照 | 1ml×1 |
酶标结合物 | 20ml×1 |
样品稀释液 | 50ml×1 |
底物液 | 20ml×1 |
终止液 | 15ml×1 |
20×浓缩洗涤液 | 50ml×1 |
封口胶 | 2份 |
使用说明书 | 1份 |
【成分性状】
包被板 | 96孔塑制微孔板,无色透明,干燥,无杂质吸附 |
酶标结合物 | 略带黄色澄明液体 |
阴、阳性对照 | 略带黄色澄明液体 |
样品稀释液 | 略带黄色澄明液体 |
浓缩洗涤液 | 无色或略带黄色的澄明液体 |
底物液 | 无色或微蓝色澄明液体 |
终止液 | 无色澄明液体,低温条件下可能会出现絮状沉淀 |
【用法与判定】 按以下步骤进行:
1、需要自备的器材
1.1 微量移液器;
1.2 微量移液器配套使用的枪头;
1.3 用来稀释洗涤液的500ml量筒;
1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪;
1.5 用于稀释样品的1.5ml Ep管;
1.6 蒸馏水或去离子水。
2、样品的制备
用样品稀释液将待检血清样品进行50倍稀释(建议:4μl血清样品加入196μl样品稀释液中),样品加入包被板前要充分混匀,稀释不同待检样品注意更换枪头。注意:①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生;②不能稀释阴性、阳性对照。
3、操作步骤 (﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀,所有试剂应恢复至室温)
3.1 在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照;
3.2 在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照;
3.3 取100μl稀释好的待检样品加入相应孔中,并做好记录;
3.4 37℃孵育30min;
3.5 将各孔的液体弃入废液桶,每孔加250μl的洗涤液(试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶,需先溶解后,方可进行稀释)进行洗板,重复5次,每次30s;
﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果,尽量将孔内洗涤液抛甩干净;
3.6 每孔加100μl酶标结合物;
3.7 37℃孵育30min;重复步骤3.5;
3.8 每孔加100μl底物液;
3.9 37℃孵育10min(避光显色);
3.10 每孔加50μl的终止液;
3.11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值,即OD450值。
4、试验有效性判断
4.1阴性对照:正常情况下,阴性对照孔OD450值≤0.3;
4.2阳性对照:正常情况下,阳性对照孔OD450值≥0.6;
4.3临界值(C.O.)计算:临界值=0.18+阴性对照均值;阴性对照OD450值大于0.3时应舍弃,如所有阴性对照OD450值均大于0.3时须重复实验;阴性对照低于0.05时以0.05计算。
4.4结果判定: 检测样品OD450值≥临界值,判定该检测样品为阳性; 检测样品OD450值<临界值,判定该检测样品为阴性。
【注意事项】
(1)待检血清样品数量过多时,应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后,再统一将血清样品加入酶标板中,使反应时间一致。
(2)试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。
(3)底物液和终止液对皮肤有刺激性,注意防护。
(4)底物液不要暴露于强光和任何氧化剂;使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。
(5)所有试剂应在2~8℃存放;使用前恢复到室温,使用后放回2~8℃。
(6)注意防止试剂盒组分受到污染。
(7)不要使用超过有效期的试剂,不同批次试剂盒的组分不要混用。
(8)操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。
【规格与包装】96T×2
【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为12个月
仅供兽医诊断使用
长期提供原核、真核蛋白表达构建服务
长期 提供抗原偶联、 HRP、生物素、糖基化、亲和素、FITC等偶联标记多肽、抗体、抗原、蛋白等服务
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