四环素类ELISA检测试剂盒

一、原理

四环素类ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中四环素类的残留量。

二、适用范围

定量检测组织、蜂蜜、牛奶样本中四环素类残留。

三、四环素类ELISA检测试剂盒特点及技术指标

* 检 测 时 间 ： 40min

  试剂盒灵敏度： 0.1ppb(µg/kg)

* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值＜1ppb；

* 样品直接稀释用于检测，结果准确；

* 试剂盒提供近工作浓度标准品，使用更方便。

试剂盒检测样本的灵敏度和准确度：

试剂盒特异性：

四、所需材料

仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、均质器、振荡器、离心机、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：单道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

试剂：去离子水

五、 试剂盒组成

*注：A、B、C、D、E5个标准品浓度为：0 ppb, 5 ppb,15 ppb, 45ppb, 135ppb，稀释50倍使用，现配现用，配后避光放置并于半小时内使用，具体见溶液配制。

六、溶液配制

配液1: 洗涤工作液

用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

配液2: 1×四环素样品稀释液

用去离子水将10×四环素样品稀释液按1: 9的体积比进行稀释，用于样本的稀释，1×四环素稀释液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。                                                         

配液3: 1×四环素提取液

  用去离子水将10×四环素提取液按1: 9的 体积比进行稀释，用于样本的提取，1×四环素提取液在室温环境可保存一个月。

配液4:  四环素工作浓度标准品

七、样本前处理                                                   

样本处理前须知：

① 处理完的样品应及时进行下步检测，实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。

（一）蜂蜜 （原蜜、成品蜜，稀释倍数：30）

① 称取样品1.0g ± 0.05g至7mL离心管中，加  入2mL 去离子水，震荡使其溶解（若浑浊需离心）；

② 取出50μL清亮液体，加到450μL 去离子水中，混匀，取50μL直接用于分析。

（二）猪肉、鱼虾、鸡肉（稀释倍数：40）

① 称取样品1.0g ± 0.05g至50mL离心管中，加  入3mL  1×四环素提取液，震荡提取2-3min；

② 4000rpm离心5min；

③ 取50μL上清液加到450μL1×四环素样品稀释液，混匀，取50μL用于分析。

（三）生鲜奶（稀释倍数：1）

  取新鲜无变质的生奶，取适量回温后直接用于分析。

八、 酶标免疫测定程序

• 将所有所需试剂从冷藏环境中取出，待其*回升至室温后方可使用，根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~3小时。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
•  按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
•  加标准品/样品、酶、抗体：加标准品/样品50µL 到对应的微孔中，加入四环素类酶标物50µL /孔， 再加入四环素类抗体50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min。
•  洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，

加入洗涤工作液250 µL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

•  显色：加入底物液A液50 µL/孔，再加底物    

液B液50 µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10min。

•  测定：加入终止液50µL/孔，用酶标仪立即  测定双波长450/630nm吸光度值。

九、 结果判定

以标准品百分吸光率为纵坐标，以四环素类标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中四环素类实际浓度。（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）

十、 注意事项

① 根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~2小时，体积15毫升以上的先从冷藏环境取出回温。

② 50*四环素标品使用完毕后请及时放回冰箱避光保存。

③ 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

④不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。

⑤ 0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色    时间为15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min，反之则减短反应时间。

⑦ 底物液B液长期使用变为浅蓝色时，请放心使用，不影响检测结果。

⑧ 未提及样本请致电本公司技术服务部。

十一、贮藏条件及保存期

    贮藏条件： 2～8℃

保 质 期： 12个月