呕吐毒素ELISA检测试剂盒

一、原理

呕吐毒素ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中呕吐毒素的残留量。

二、适用范围

定量检测粮食、饲料等样本中呕吐毒素残留。

三、呕吐毒素ELISA检测试剂盒特点及技术指标

* 检 测 时 间 ： 30 min

  试剂盒灵敏度：5 ppb (µg/kg)

* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值＜2ppb

* 样品处理方法更加简洁，符合率大于90%

试剂盒检测样本的灵敏度和准确度：

试剂盒特异性：

四、所需材料

仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、均质器、振荡器、离心机、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：单道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道50µL～300µL

试剂：去离子水、甲醇

五、 试剂盒组成

*注：A、B、C、D、E共5个标准品浓度为：0 ppb, 10 ppb, 30 ppb,90ppb, 270ppb, A、B标准品各1mL，其余各0.5mL，直接使用。

六、溶液配制

配液1: 洗涤工作液

用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

配液2:  1×呕吐毒素样品稀释液     

用去离子水将2×呕吐毒素稀释液按1:1体积比进行稀释，用于样本的稀释，配好后在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

配液3:  样品提取液

将甲醇与去离子水按V_甲：V_水=4:1 体积比配制成80%甲醇，即样品提取液。

七、样本前处理                                                   

样本处理前须知：

① 处理完的样品应及时进行下步检测，实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。

② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。

花生粕、猪育肥料、乳猪料、牛饲料、玉米、全麦（稀释倍数：20）

① 称取样品1.0g ± 0.05g至离心管中，加入

10 mL样品提取液（配液3），震荡提取1min；

② 4000rpm离心5min.；

③ 小心移取上清液500 μL 加到500 μL 1×呕吐毒素样品稀释液中， 混匀，取50 μL用于分析。

八、 酶标免疫测定程序

• 将所需试剂从冷藏环境中取出，待其*回  升至室温（20～25℃）后方可使用。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
•  按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
•  加标准品/样品、酶、抗体：加标准品/样品50µL 到对应的微孔中，加入呕吐毒素酶标物50µL /孔， 再加入呕吐毒素抗体50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应20min。
•  洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，

加入洗涤工作液250µL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

•  显色：加入底物液A液50µL/孔，再加底物    

液B液50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10min。

•  测定：加入终止液50µL/孔，用酶标仪立即  测定450nm处的吸光度值（建议用双波长450/630nm）检测。

九、 结果判定

以标准品百分吸光率为纵坐标，以呕吐毒素标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中呕吐毒素实际浓度。（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）

十、 注意事项

① 洗板拍干后应立即进行下一步操作。

② 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

③ 不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。

④ 0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为10～15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min，反之则减短反应时间。

⑥ 未提及样本请致电本公司技术服务部。

• 贮藏条件及保存期

     贮藏条件： 2～8℃

保 质 期： 12个月