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替米考星ELISA检测试剂盒

简要描述:替米考星ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中替米考星的残留量。定量检测组织样本中替米考星残留。

  • 产品型号:替米考星
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2019-01-24
  • 访  问  量:1000
详情介绍

一、原理

替米考星ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品替米考星残留量。

二、适用范围

定量检测组织样本中替米考星残留。

三、替米考星ELISA检测试剂盒特点及技术指标

* 检 测 时 间 : 30min

  试剂盒灵敏度: 0.1ppb(µg/kg)

* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值<0.04ppb;

* 样品处理方法简洁,符合率大于95%;

试剂盒检测样本的灵敏度和准确度:

试剂盒交叉反应率:

药物

交叉反应率%

替米考星

100

红霉素

12

环丙沙星

1

、所需材料

仪器微孔板酶标仪450 nm/630 nm均质器、振荡器离心机、天平(感量0.01 g)、离心管(5 mL, 50 mL)

微量移液器:单道 1µL~10 µL、10 µL~100µL

多道 50µL~300µL

试剂:去离子水乙腈

、 试剂盒组成

序号

组成部分

96T装量

1

替米考星酶标板

12×8孔

2

替米考星标准品*5

5×0.5mL

3

替米考星酶标物

7 mL

4

替米考星抗体

7 mL

5

底物A液

7 mL

6

底物B液

7 mL

7

终 止 液

7 mL

9

2×替米考星样品稀释液

40mL

10

10×替米考星样品提取液

40mL

11

20×洗涤液

40mL

样本

检测下限

回收率

组织

10ppb 

70%-120%

*注:5个标准品A、B、C、D、E浓度分别为:0 ppb, 0.1 ppb, 0.3 ppb, 0.9 ppb, 2.7 ppb,A、B各1 mL,C、D、E各0.5 mL直接使用。

 

六、溶液配制

配液1: 洗涤工作液

用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释,用于酶标板的洗涤,洗涤工作液在4℃环境可保存一个月,用前一天取出回温。

配液2:  1 ×替米考星样品稀释液    

用去离子水将2×替米考星样品稀释液按1:1体积比进行稀释配好替米考星样品稀释液在4℃环境可保存一个月,用前一天取出回温。

配液3:  1 ×替米考星样品提取液    

用去离子水将10×替米考星样品提取液9:1体积比进行稀释配好替米考星样品提取液在4℃环境可保存一个月,用前一天取出回温。

七、样本前处理                                                   

样本处理前须知:

① 处理完的样品应及时进行下步检测,实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。

组织(稀释倍数:100)

  • 称取糊状样品1.0g ± 0.05g至50mL离心管中,加入2mL 替米考星样品提取液, 震荡提取1min;
  • 再加入2 mL乙腈,震荡提取1min;
  • 4000rpm离心5min.;
  • 小心取出上层溶液50μL至另一装有950μL 替米考星样品稀释液的离心管中,震荡混匀,取50μL用于分析。

、 酶标免疫测定程序

  • 将所有所需试剂从冷藏环境中取出,待其*回升至室温后方可使用,根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~2小时。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
  •  按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
  •  加标准品/样品、酶、抗体:加标准品/样品50µL到对应的微孔中,加入替米考星酶标物50µL/孔,加入替米考星抗体50µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应20min。
  •  洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,

加入洗涤工作液300 µL/孔,每次静置20s,甩去孔内液体,重复洗涤3次,后一次用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。

  •  显色:加入底物液A液50 µL/孔,再加底物    

   液B液50 µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜             

     盖板后置37℃避光环境中反应10min。

  • 测定:加入终止液50µL/孔,用酶标仪立即  测定450/630nm处的吸光度值。

、 结果判定

以标准品百分吸光率为纵坐标,以替米考星标准品浓度(ppb)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中替米考星实际浓度。(详见试剂盒专业分析软件,以便进行大量样本的分析计算。)

、 注意事项

① 根据体积大小不同取出回温的时间从1 h~3 h,体积15 mL以上的先从冷藏环境取出回温,

洗板拍干后应立即进行下一步操作

反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。

不使用过了有效期的试剂盒,不交换使用不同批号的试剂。

⑤ 0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色    时间为15min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到20min,反之则减短反应时间。

⑦ 底物液B液长期使用变为浅蓝色时,请放心使用,不影响检测结果。

十一贮藏条件及保存期

    贮藏条件: 28

保 质 期: 12个月

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