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0543-3202800血液RNA核酸免提取试剂盒
试剂盒应用
本试剂盒采用特殊裂解液B从新鲜全血、抗凝血、血凝块中提取并纯化RNA。整个过程仅需要10分钟。采用硅基材质吸附柱,高效专一吸附RNA,保证提取高纯度、高产量RNA。该裂解液配方中含有RNA保护剂,能够抑制RNA降解、保护RNA完整,从而提高RNA产量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。
本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。
试剂盒组成
组分 | Col-R0301(50T) | 编号 |
裂解液B | 35 mL | Col-R0301A |
洗涤液BW1 | 25 mL | Col-R0301B |
洗涤液BW2 | 12 mL | Col-R0301C |
洗脱液B | 5 mL | |
RNA吸附柱 | 50套 | Col-R0301E |
备注:1、第一次使用前,在洗涤液BW2中加入48mL无水乙醇,并标记“√"和时间,避免重复加入。
保存条件
室温保存一年。
自备材料
水浴锅或金属浴、无水乙醇、1.5mL无RNase离心管、蛋白酶K(20mg/mL,或货号QR0301)、DNase I(2U/μL,或货号QR0102)
使用方法
1. 300μL血液(不足300μL,无菌PBS补齐)中加入500μL裂解液B和10μL蛋白酶K,颠倒混匀。
2. 55℃孵育2分钟。
备注:如果RNA提取量比较低,可延长孵育时间到10分钟。
3. 12,000rpm离心30秒。取750μL上清。
4. 加入0.5倍体积无水乙醇,上下颠倒混匀,
5. 全部加入RNA吸附柱中,12,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。
6. 向RNA吸附柱中加入500μL洗涤液BW1,12,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。
7. 向RNA吸附柱中加入500μL洗涤液BW2,12,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。
8. 重复步骤7一次。
9. 12,000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。
10. 将RNA吸附柱放入新1.5mL无RNase离心管中,加入30-50μL洗脱液B,室温放置1分钟。
11. 12,000rpm离心2分钟,得到RNA溶液,-80℃保存。
注意事项
1. 务必在超净台中进行操作,常换手套,防止RNA降解。
2. 尽可能使用新鲜样本进行RNA提取。
3. 使用无DNase无RNase的吸头和离心管,防止RNA降解,常更换吸头,防止交叉污染。
4. 为了提高洗脱效率,可提前将洗脱液B置于65℃水浴后再使用。
5. 根据后续试验需求,请使用DNase I(货号QR0102)进行基因组清除。
常见问题解析
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
RNA吸附柱 堵塞 | (1)上样量太高 (2)加入RNA吸附柱的液体中有固体成分或沉淀物 | (1)减少上样量。 (2)增加离心时间。 (3)切勿吸取到可见固体成分。 (4)再次离心。 |
RNA得率低 | (1)未离心下来 (2)样本量太大,裂解不充分 | (1)减少样本量。 (2)重复洗脱步骤一次。 |
RNA降解 | (1)样本不新鲜 (2)RNA酶污染 | (1)使用新鲜样本。 (2)使用保存在样品保存液中样本。 (3)样本保存在-80℃甚至液氮中,尽可能现取现用。 (4)常更换手套。 (5)常更换吸头和离心管。 (6)使用无DNase无RNase的吸头和离心管。 |
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