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血液RNA核酸免提取试剂盒

简要描述:血液RNA核酸免提取试剂盒

试剂盒应用
本试剂盒采用特殊裂解液B从新鲜全血、抗凝血、血凝块中提取并纯化RNA。整个过程仅需要10分钟。采用硅基材质吸附柱,高效专一吸附RNA,保证提取高纯度、高产量RNA。该裂解液配方中含有RNA保护剂,能够抑制RNA降解、保护RNA完整,从而提高RNA产量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-27
  • 访  问  量:446
详情介绍

血液RNA核酸免提取试剂盒

 

试剂盒应用

本试剂盒采用特殊裂解液B从新鲜全血、抗凝血、血凝块中提取并纯化RNA整个过程仅需要10分钟。采用硅基材质吸附柱,高效专一吸附RNA,保证提取高纯度、高产量RNA该裂解液配方中含有RNA保护剂,能够抑制RNA降解、保护RNA完整,从而提高RNA产量。提取RNA可用于RT-PCRRT-qPCRNorthern Blot、分子克隆、文库构建等。

本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。

 

试剂盒组成

组分

Col-R030150T

编号

裂解液B

35 mL

Col-R0301A

洗涤液BW1

25 mL

Col-R0301B

洗涤液BW2

12 mL

Col-R0301C

洗脱液B

5 mL


RNA吸附柱

50

Col-R0301E

备注:1第一次使用前,在洗涤液BW2中加入48mL无水乙醇,并标记"和时间,避免重复加入。

 

保存条件

室温保存一年

 

自备材料

水浴锅或金属浴、无水乙醇、1.5mLRNase离心管、蛋白酶K20mg/mL,或货号QR0301)、DNase I2U/μL,或货号QR0102

 

使用方法

1. 300μL血液(不足300μL,无菌PBS补齐)中加入500μL裂解液B10μL蛋白酶K,颠倒混匀。

2. 55℃孵育2分钟。

备注:如果RNA提取量比较低,可延长孵育时间到10分钟。

3. 12,000rpm离心30秒。取750μL上清。

4. 加入0.5倍体积无水乙醇,上下颠倒混匀,

5. 全部加入RNA吸附柱中,12,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。

6. RNA吸附柱中加入500μL洗涤液BW112,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。

7. RNA吸附柱中加入500μL洗涤液BW212,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。

8. 重复步骤7一次。

9. 12,000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。

10. RNA吸附柱放入新1.5mLRNase离心管中,加入30-50μL洗脱液B,室温放置1分钟。

11. 12,000rpm离心2分钟,得到RNA溶液,-80℃保存。

 

注意事项

1. 务必在超净台中进行操作,常换手套,防止RNA降解。

2. 尽可能使用新鲜样本进行RNA提取。

3. 使用无DNaseRNase的吸头和离心管,防止RNA降解,常更换吸头,防止交叉污染。

4. 为了提高洗脱效率,可提前将洗脱液B置于65℃水浴后再使用。

5. 根据后续试验需求,请使用DNase I(货号QR0102)进行基因组清除。

 

常见问题解析

问题

可能原因

推荐解决方案

RNA吸附柱

堵塞

(1)上样量太高

(2)加入RNA吸附柱的液体中有固体成分或沉淀物

(1)减少上样量。

(2)增加离心时间。

(3)切勿吸取到可见固体成分。

(4)再次离心。

RNA得率低

(1)未离心下来

(2)样本量太大,裂解不充分

(1)减少样本量。

(2)重复洗脱步骤一次。

RNA降解

(1)样本不新鲜

(2)RNA酶污染

(1)使用新鲜样本。

(2)使用保存在样品保存液中样本。

(3)样本保存在-80℃甚至液氮中,尽可能现取现用。

(4)常更换手套。

(5)常更换吸头和离心管。

(6)使用无DNaseRNase的吸头和离心管。

 


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