细胞RNA核酸免提取试剂盒

细胞RNA核酸免提取试剂盒

试剂盒应用

本试剂盒采用专用裂解液CP在10分钟内完成细胞的裂解、提取和纯化。无需使用蛋白酶K、无需低温离心。该配方中含有RNA保护剂，能够抑制RNA降解、保护RNA完整，从而提高RNA产量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。

本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。

试剂盒组成

备注：第一次使用前，在洗涤液CPW中加入48mL无水乙醇，并标记“√"和时间，避免重复加入。

保存条件

室温保存一年。

自备材料

水浴锅或金属浴、无水乙醇、1.5mL无RNase离心管、DNase I（2U/μL，或货号QR0102）

使用方法

1. 样本准备

1.1 悬浮细胞1,000rpm离心5分钟，收集细胞沉淀。

或贴壁细胞用yimei消化细胞后1,000rpm离心5分钟，收集细胞沉淀。

1.2 细胞数量<5×10⁶个时，加入500μL裂解液CP。细胞数量为5×10⁶~1×10⁷个时，加入700μL裂解液CP。轻轻吹打混匀。55℃孵育1分钟。

1.3 12,000rpm离心1分钟。

1.4 细胞数量<5×10⁶个时，取450μL上清。细胞数量为5×10⁶~1×10⁷个时，取650μL上清。

1.5 加入0.5倍体积无水乙醇，充分混匀。按照步骤2.1-2.7操作。

2. RNA纯化

2.1全部加入RNA吸附柱中，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液。

2.2向RNA吸附柱中加入500μL洗涤液CPW，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。

2.3 重复步骤2.2一次。

2.5 12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。

2.6 将RNA吸附柱放入新1.5mL无RNase离心管中，加入30-50μL洗脱液C，室温放置1分钟。

2.7 12,000rpm离心2分钟，得到RNA溶液，-80℃保存。

注意事项

1. 务必在超净台中进行操作，常换手套，防止RNA降解。

2. 尽可能使用新鲜样本进行RNA提取。

3. 使用无DNase无RNase的吸头和离心管，防止RNA降解，常更换吸头，防止交叉污染。

4. 为了提高洗脱效率，可提前将洗脱液CP置于65℃水浴后再使用。

5. 根据后续试验需求，请使用DNase I（货号QR0102）进行基因组清除。

常见问题解析