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细胞和组织DNA核酸免提取试剂盒

简要描述:细胞和组织DNA核酸免提取试剂盒

试剂盒应用
本试剂盒针对哺乳动物细胞、组织开发的专用裂解液DC,在10分钟内完成细胞和组织的裂解、提取和纯化。使用高效硅基DNA纯化柱,高效结合基因组DNA,从而获得纯度高,产量高的基因组DNA。提取的基因组DNA完整性高,适合PCR、qPCR、酶切、Southern杂交、文库构建、克隆等。
本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-27
  • 访  问  量:288
详情介绍

细胞和组织DNA核酸免提取试剂盒

 

试剂盒应用

本试剂盒针对哺乳动物细胞、组织开发的专用裂解液DC10分钟内完成细胞和组织的裂解、提取和纯化使用高效硅基DNA纯化柱,高效结合基因组DNA,从而获得纯度高,产量高的基因组DNA。提取的基因组DNA完整性高,适合PCRqPCR、酶切、Southern杂交、文库构建、克隆等。

本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。

 

试剂盒组成

组分

Col-D010150T

编号

裂解液DC

35 mL

Col-D0101A

洗涤液DCW1

25 mL

Col-D0101B

洗涤液DCW2

12 mL

Col-D0101C

洗脱液C

5 mL


DNA纯化柱

50

Col-D0101E

备注:第一次使用前,在洗涤液DCW2中加入48mL无水乙醇,并标记"和时间,避免重复加入。

 

保存条件

室温保存一年

 

自备材料

水浴锅或金属浴、无水乙醇、DNase和无RNase离心管、RNaseA10mg/mL,或货号QR0101

 

使用方法

1. 样本处理

1.1 从动物组织中提取DNA

1.1.1 20-100mg样本放入液氮中充分研磨,加入700μL裂解液DC,充分混匀,室温作用1分钟。

20-100mg样本加入700μL裂解液DC,加入1颗钢珠,放入组织研磨器中,研磨1-2分钟。

备注:不同样本中RNA含量差异很大,过多使用样本容易导致堵塞,最终导致RNA提取量下降。1.1.2 55℃孵育1分钟。

1.1.3 12,000rpm离心1分钟。取500μL上清。

1.1.4 (选做)加入5μL RNase A10mg/mL),室温静置5-10分钟。

1.1.5 加入250μL无水乙醇,充分混匀。按照步骤2.1-2.7操作。

 

1.2 从悬浮细胞中提取DNA

1.2.1 细胞1,000rpm离心5分钟,收集细胞沉淀。

1.2.2 细胞数量<5×106时,加入500μL裂解液DC。细胞数量为5×106~1×107时,加入700μL裂解液DC。轻轻吹打混匀,55℃孵育1分钟。

1.2.3 12,000rpm离心1分钟。

1.2.4 细胞数量<5×106时,450μL上清。细胞数量为5×106~1×107时,650μL上清。

1.2.5(选做)加入5μL RNase A10mg/mL),室温静置5-10分钟。

1.2.6 加入0.5倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤2.1-2.7操作。

 

1.3 从贴壁细胞中提取DNA

1.3.1 yimei消化细胞后1,000rpm离心5分钟,收集细胞沉淀。

1.3.2 细胞数量<5×106时,加入500μL裂解液DC。细胞数量为5×106~1×107时,加入700μL裂解液C。轻轻吹打混匀,55℃孵育1分钟。

1.3.3 12,000rpm离心1分钟。

1.3.4 细胞数量<5×106时,450μL上清。细胞数量为5×106~1×107时,650μL上清。

1.3.5 (选做)加入5μL RNase A10mg/mL),室温静置5-10分钟。

1.3.6 加入0.5倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤2.1-2.7操作。

 

2. DNA纯化

2.1 全部转移到DNA纯化柱中,12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液。

2.2 DNA纯化柱中加入500μL洗涤液DCW112,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。

2.3 DNA纯化柱中加入500μL洗涤液DCW212,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。

2.4 重复步骤2.3一次。

2.5 12,000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。

2.6 DNA纯化柱放入新DNase和无RNase离心管,加入30-50μL 洗脱液C,室温放置1分钟。

2.7 12,000rpm离心2分钟,得到DNA溶液,-80℃保存。

 

注意事项

1. 经常更换手套,防止DNA污染。

2. 使用无DNaseRNase的吸头和离心管,防止DNA降解。

3. 常更换吸头,防止交叉污染。

4. 动作轻柔,防止基因组DNA断裂。

5. 为了提高洗脱效率,可提前将洗脱液C置于65℃水浴后再使用。

 

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