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0543-3202800一、原理
粮食饲料版T2毒素ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中T2毒素的残留量。
二、适用范围
定量检测粮食、饲料等样品中T2毒素的残留。
三、粮食饲料版T2毒素ELISA检测试剂盒特点及技术指标
* 检 测 时 间 : 30 min
* 试剂盒灵敏度: 1ppb(µg/kg)
* 样本处理方法简单,并与赭曲霉前处理方法部分统一化,节省了人力物力;
* 试剂盒提供工作浓度标准品,使用更方便;
* 试剂盒检测样本的灵敏度和准确度:
样本 | 检测下限 | 回收率 |
粮食 | 100pb | 70%-120% |
饲料 | 100pb | 70%-120% |
试剂盒特异性:
药物名称 | 交叉反应率(%) |
T2毒素 | 100% |
玉米赤霉烯醇 | < 1% |
四、所需材料
仪器:微孔板酶标仪450 nm/630 nm、振荡器、离心机、刻度移液管(10 mL)、洗耳球、天平(感量0.01 g)、离心管(5 mL, 50 mL)、漏斗、分液漏斗、烧杯、定量分析滤纸
微量移液器:单道 1µL~10 µL、10 µL~100µL
多道 50µL~300µL
试剂:甲醇、去离子水。
五、 试剂盒组成
序号 | 组成部分 | 96T装量 |
1 | T2毒素酶标板 | 12×8孔 |
2 | T2毒素标准品*5 | 0.5-1 mL |
3 | T2毒素酶标物 | 7 mL |
4 | T2毒素抗体 | 7mL |
5 | 底物液A液 | 7 mL |
6 | 底物液B液 | 7 mL |
7 | 终 止 液 | 7 mL |
8 | 20×浓缩洗涤液 | 40 mL |
9 | 2×T2毒素样品稀释液 | 40mL |
*注:A、B、C、D、E共5个标准品浓度为:0ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb,A、B标准品各1mL,其余各0.5mL,直接使用。
六:溶液配制
配液1: 洗涤工作液
用去离子水将20 ×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释。配好的洗涤工作液在4 ℃环境可保存一 个月,用前一天取出回温。
配液2: 1×T2毒素样品稀释液
用去离子水将2×T2毒素样品稀释液按1:1体积比进行稀释,用于样本的稀释,配好后在4℃环境可保存一个月,用前一天取出回温。
配液3: 样品提取液
将甲醇与去离子水按V甲:V水=4:1 体积比配制成80%甲醇,即样品提取液。
七、样本前处理
样本处理前须知:
① 处理完的样品应及时进行下步检测,实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。
② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。
乳猪料、猪育肥料、花生粕、牛饲料、 全麦、全玉米(稀释倍数:100倍)
① 称取粉碎样品1.0 g ± 0.05 g至离心管中,加入 10 mL 样品提取液(配液3), 震荡提取1 min;
② 4000 r / min离心5 min;
③ 小心移取上清液100 μL 加到400μL 1 ×T2毒素样品稀释液中, 混匀,取50 μL用于分析。
八、 酶标免疫测定程序
加入洗涤工作液250µL/孔,每次静置20s,甩去孔内液体,重复洗涤3次,后一次用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
液B液50µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10min。
九、 结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标,以T2毒素标准品浓度(ppb)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中T2毒素实际浓度。(详见试剂盒专业分析软件,以便进行大量样本的分析计算。)
十、 注意事项
① 洗板拍干后应立即进行下一步操作。
② 反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
③ 不使用过了有效期的试剂盒,不交换使用不同批号的试剂。
④ 0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为10~15min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到20min,反之则减短反应时间。
⑥ 未提及样本请致电本公司技术服务部。
十一、贮藏条件及保存期
贮藏条件: 2~8℃
保 质 期: 12个月
十二、问题与对
序号 | 现象 | 可能原因 | 解决方法 |
1 | 板条不显色或者无相应数值 | 试剂使用顺序混乱,或操作步骤出错 | 严格遵循实验说明重复实验 |
使用了不同批次的试剂 | 确保试剂来自同一试剂盒 | ||
板条受潮严重 | 板条要封好,干燥剂失效要及时更换 | ||
2 |
低 吸 光 度
OD 值
| 试剂过期,或者不同的批次混用 | 查证过期试剂和批次 |
洗液配制错误、洗涤浸泡时间过长 | 按照说明书要求洗涤,并正确配制洗液 | ||
孵育时间过短 | 按照说明书要求,严格计算好时间 | ||
试剂污染 | 确保吸取不同液体更换新的枪头和盛放器皿 | ||
试剂温度过低 | 根据试剂体积大小回温时间相应延长,确保试剂*回温 | ||
使用错误波长读数,或者酶 标仪失灵 | 确保450nm波长读数,检查酶标仪是否故障 | ||
试剂盒处于的条件 | 使用完毕的部分请立即放回冰箱,勿置于过热环境时间太长 | ||
3 | 过高的 背景值或吸光度(OD值) | 使用了质量差的水配制试剂 | 使用双蒸水或去离子水配制试剂 |
洗涤不当或者洗板机洗板效果不好 | 增加1-2次洗涤,每孔至少加入250μL洗液 | ||
酶标仪失灵,如OD值读数很高而颜色很浅 | 使用校正微孔板检查酶标仪,检查光源 | ||
实验室温度过高,反应时间过长 | 测定操作温度是否合适,时间是否计算正确 | ||
试剂混淆,被污染或者配制不当 | 确保使用正确的试剂,准确配制,避免污染 | ||
4
| 板内 差异性 大 | 加入标准品和样品等的时间不* | 使用多道枪加样,同种试剂加样途中不能中断 |
多道枪使用不当 | 校准多道枪,检查吸嘴是否套紧,确保吸液量* | ||
洗涤系统出现故障 | 检查洗涤系统,保持良好运行 | ||
5 | 板 间 差 异 性 大
| 板与板之间孵育时间相差太大 | 独立计时,确保*的孵育时间 |
板与板之间不*的洗涤过程 | 确保相同的洗涤次数,保证洗涤系统正常运作 | ||
使用移液枪不当 | 检查移液枪,确保吸取相同液量 | ||
试剂和样品处于不同温度 | 确保盒内试剂和样品液等充分回温,如果试剂体积较大则需要回温较长时间。不能用温水浴回温样品 | ||
不同批次的试剂混用,或试剂盒过期 | 试剂不要混用,通常0标准品的OD值小于0.5显示试剂质量下降 | ||
6 | 一个或多个标准品数据点超出曲线范围 | 标准品添加顺序混乱,或者放置于错误位置 | 按照说明要求重复实验,保证标准品添加正确。 |
标准品被污染或与其他标准品混淆 | 改用新的标准品,按照由低浓度到高浓度的顺序添加标准品 | ||
洗涤不*或者洗涤系统失灵 | 遵循一如既往的洗涤方式,检查洗涤系统 | ||
加入标准品和试剂的时间不* | 由低到高浓度依次添加标准品,使用多道枪移液 | ||
多道枪使用不当 | 校准多道枪,检查吸嘴是否套紧,确保吸液量* |