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呋喃代谢物四合一ELISA检测试剂盒组织蜂蜜

简要描述:呋喃代谢物四合一ELISA检测试剂盒组织蜂蜜版采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中呋喃代谢物的残留量。定量检测组织、蜂蜜样品中呋喃代谢物的残留。

  • 产品型号:呋喃代谢物四合一
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2019-01-23
  • 访  问  量:671
详情介绍

一、原理

呋喃代谢物四合一ELISA检测试剂盒组织蜂蜜采用间接竞争ELISA方法定量检测样品呋喃代谢物残留量。

二、适用范围

定量检测组织、蜂蜜样品中呋喃代谢物的残留。

三、呋喃代谢物四合一ELISA检测试剂盒组织蜂蜜特点及技术指标

* 检 测 时 间 :40min-70min

* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值<0.05 ppb;

样本

检测下限

回收率

呋喃唑酮

0.2ppb

70%-120%

  呋喃西林

0.2ppb

70%-120%

呋喃它酮

0.1ppb

70%-120%

呋喃妥因

0.2ppb

70%-120%

试剂盒检测样本的灵敏度、准确度和特异性

 

药物名称

交叉反应率(%)

呋喃唑酮

100%

     呋喃西林

100%

呋喃它酮

100%

呋喃妥因

100%

、所需材料

仪器微孔板酶标仪450 nm/630 nm均质器、振荡器、氮吹仪、离心机刻度移液管(10 mL)、天平(感量0.01 g)、离心管(5 mL, 50 mL)

微量移液器:10 µL~100µL100 µL~1000µL

试剂:乙酸乙酯去离子水、 浓盐酸 、氢氧化钠

、 试剂盒组成

组成部分

96T装量

1

呋喃酶标板

96×4

2

呋喃标准品*5

0.5-1mL

3

呋喃酶标物

40mL

4

呋喃抗体

7mL*4

5

底物A液

28mL

6

底物B液

28 mL

7

终 止 液

28mL

8

       20×浓缩洗涤液

160 mL

9

2×呋喃样品稀释液

160 mL

10

呋喃衍生化试剂

40 mL

注*:标准品A、B、C、D、E

喃它酮标准品:0,0.05,0.15,0.45,1.35ppb;

喃妥因标准品:0,0.1,0.3,0.9,2.7ppb;

呋喃唑酮标准品:0,0.1,0.3,0.9,2.7ppb;

呋喃西林标准品:0,0.1,0.3,0.9,2.7ppb;A、B标准品各1mL,其余各0.5mL,直接使用。

六、溶液配制

配液1: 洗涤工作液

   用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积   比进行稀释,用于酶标板的洗涤,洗涤工作液在4℃环境可保存一个月,用前一天取出回温。

配液2:  1×呋喃样品稀释液     

   用去离子水将2×呋喃样品稀释液  按1:1体积比进行稀释,用于样本的稀释,配好后在4℃环境可保存六个月,用前一天取出回温。

配液3:  0.1 M HCl

   量取860 μL浓盐酸加去离子水/双蒸水混匀定容至100 mL,浓盐酸挥发在通风橱内操作。

配液4:  0.1 M NaOH

    称取0.4g 氢氧化钠加去离子水溶解至100ml。

七、样本前处理                                                   

样本处理前须知:

① 处理完的样品应及时进行下步检测,实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。

② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。

动物组织、蜂蜜 (稀释倍数:2

  ① 称取2.0±0.05g均质后的样本,加入8ml

  0.1 M HCl 和400μL 呋喃衍生化试剂,用振荡器充分振荡1min;

    ② 置于37 ℃过夜孵育(大约16h);

 分别加入8 ml 0.1 M NaOH和20ml乙酸乙酯,用振荡器剧烈振荡30s;

 4000r/min,室温(20~25℃/68-77℉)离心5min;

 取上层10ml乙酸乙酯相至离心管中,于50~60℃氮气流下吹干;

 加入1.6 ml 1×呋喃样品稀释液(动物组织、蜂蜜)用涡旋仪涡动60s使干燥物溶解,用于分析。

、 酶标免疫测定程序

  • 将所需试剂从冷藏环境中取出,待其*回  升至室温(20~25℃)后方可使用。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
  •  按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
  •  按下列方式点板

  呋喃唑酮、呋喃西林:

(1)加标准品/样品、酶、抗体:加标准品/样品50µL 到对应的微孔中,加入呋喃酶标物50µL /孔, 再加入呋喃唑酮/呋喃西林抗体50µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板37℃避光环境中反应30min。

(2)洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加入洗涤工作液250 µL/孔,每次静置20s,甩去孔内液体,重复洗涤3次,后一次用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。

(3)显色:加入底物液A液50 µL/孔,再加底物液B液50 µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10min。

(4)测定:加入终止液50µL/孔,用酶标仪立即  测定双波长450/630nm吸光度值。

呋喃它酮、呋喃妥因:

(1)加标准品/样品、抗体:加标准品/样品100µL

到对应的微孔中,再加入呋喃它酮/妥因抗体50µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃反应30min。

(2)洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加入洗涤工作液250µL/孔,每次静置20s,甩去孔内液体,重复洗涤3次,后一次用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。

(3)加酶标物100µL/孔,用盖板膜盖板后置37℃反应30min。

(4)洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,加入洗涤工作液250µL/孔,每次静置20s,甩去孔内液体,重复洗涤3次,后一次用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。

(5)显色:加入底物液A液50µL/孔,再加底物    

液B液50µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃反应10min。

(6)测定:加入终止液50µL/孔,用酶标仪立即测定450nm处的吸光度值(建议用双波长450/630nm)检测。

、 结果判定

以标准品百分吸光率为纵坐标,以呋喃标准品浓度(ppb)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中呋喃实际浓度。(详见试剂盒专业分析软件,以便进行大量样本的分析计算。)

、 注意事项

洗板拍干后应立即进行下一步操作

反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。

不使用过了有效期的试剂盒,不交换使用不同批号的试剂。

④ 0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为15min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到20-30min,反之则减短反应时间。

 未提及样本请致电本公司技术服务部。

十一贮藏条件及保存期

    贮藏条件: 28

保 质 期: 12个月

十二、问题与对策

序号

现象

可能原因

解决方法

1

板条不显色或者无相应数值

试剂使用顺序混乱,或操作步骤出错

严格遵循实验说明重复实验

使用了不同批次的试剂

确保试剂来自同一试剂盒

板条受潮严重

板条要封好,干燥剂失效要及时更换

 

 

 

 

2

 

 

 

OD

 

试剂过期,或者不同的批次混用

查证过期试剂和批次

洗液配制错误、洗涤浸泡时间过长

按照说明书要求洗涤,并正确配制洗液

孵育时间过短

按照说明书要求,严格计算好时间

试剂污染

确保吸取不同液体更换新的枪头和盛放器皿

试剂温度过低

根据试剂体积大小回温时间相应延长,确保试剂*回温

使用错误波长读数,或者酶

标仪失灵

确保450nm波长读数,检查酶标仪是否故障

试剂盒处于的条件

使用完毕的部分请立即放回冰箱,勿置于过热环境时间太长

 

 

3

过高的

背景值或吸光度(OD值)

使用了质量差的水配制试剂

使用双蒸水或去离子水配制试剂

洗涤不当或者洗板机洗板效果不好

增加1-2次洗涤,每孔至少加入250μL洗液

酶标仪失灵,如OD值读数很高而颜色很浅

使用校正微孔板检查酶标仪,检查光源

实验室温度过高,反应时间过长

测定操作温度是否合适,时间是否计算正确

试剂混淆,被污染或者配制不当

确保使用正确的试剂,准确配制,避免污染

 

4

 

差异性

加入标准品和样品的时间不*

使用多道枪加样,同种试剂加样途中不能中断

多道枪使用不当

校准多道枪检查吸嘴是否套紧,确保吸液量*

洗涤系统出现故障

检查洗涤系统,保持良好运行

 

 

 

5

 

板与板之间孵育时间相差太大

独立计时,确保*的孵育时间

板与板之间不*的洗涤过程

确保相同的洗涤次数,保证洗涤系统正常运作

使用移液枪不当

检查移液枪,确保吸取相同液量

试剂和样品处于不同温度

确保盒内试剂和样品液等充分回温,如果试剂体积较大则需要回温较长时间。不能用温水浴回温样品

不同批次的试剂混用,或试剂盒过期

试剂不要混用通常0标准品的OD值小于0.5显示试剂质量下降

 

 

6

一个或多个标准品数据点出曲线范围

标准品添加顺序混乱,或者放置于错误位置

按照说明要求重复实验,保证标准品添加正确。

标准品被污染或与其他标准品混淆

改用新的标准品,按照由低浓度到高浓度的顺序添加标准品

洗涤不*或者洗涤系统失灵

遵循一如既往的洗涤方式,检查洗涤系统

加入标准品和试剂的时间不*

由低到高浓度依次添加标准品,使用多道枪移液

多道枪使用不当

校准多道枪,检查吸嘴是否套紧,确保吸液量*

 

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