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非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测试剂盒1

简要描述:本试剂盒主要用于动物组织及血液中非洲猪瘟病毒DNA的扩增。将组织液(包括组织研磨液、细胞悬液、血液、血清、精液、唾液、尿液等)、组织块以及环境和拭子等样本进行处理后,可直接用于扩增。本试剂盒中使用的Rapid DNA-Lysis采用du特配方,能够快速高效的裂解各种常见样本,无需反复离心,从而获得高质量的DNA。试剂中引入了dUTP/UDG防污染系统,可消除扩增污染对qPCR的影响。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-27
  • 访  问  量:476
详情介绍

非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测试剂盒(免提法)

试剂盒应用

本试剂盒主要用于动物组织及血液中非洲猪瘟病毒DNA的扩增。将组织液(包括组织研磨液、细胞悬液、血液、血清、精液、唾液、尿液等)、组织块以及环境和拭子等样本进行处理后,可直接用于扩增。本试剂盒中使用的Rapid DNA-Lysis采用du特配方,能够快速高效的裂解各种常见样本,无需反复离心,从而获得高质量的DNA试剂中引入了dUTP/UDG防污染系统,可消除扩增污染对qPCR的影响。

本试剂盒仅供研究使用,不可用于食品、化妆品等领域。

试剂盒组成

组分

50次)

Rapid DNA-Lysis

1 mL

荧光PCR反应液

1 mL

样品稀释液

1.5mL×4

阳性对照

50 μL

阴性对照

50 μL

说明书

1

 保存条件

-20ºC保存。

使用前将Rapid DNA-Lysis室温充分混匀荧光PCR反应液、阳性对照溶解后需置于冰上。

需要准备

荧光定量PCR仪、恒温金属浴、离心机、移液器

使用方法

一、不同样品的处理方法

1. 组织液的处理

1)组织液包括组织研磨液、细胞悬液、血清、血液、唾液、尿液、精液等。取10 μL组织液置于离心管中。

2)加入20 μLRapid DNA-Lysis

3)混匀。

4)置于55℃作用5分钟加入100μL样品稀释液,混匀后,取上清。

2. 组织块的处理

1)用眼科剪取半颗米粒大小的组织块(< 3 mm3),并将组织块剪成肉泥状。

2加入20 μL Rapid DNA-Lysis

3)混匀。

4置于55℃作用5分钟加入100μL样品稀释液,混匀。

58000离心30取上清

3. 环境样本和拭子的处理

1)用棉签反复涂抹桌面、鞋底、头发、车轮等表面,并将棉棒浸泡在500ul(生理盐水PBS或水)中,作用5分钟,将棉签中液体挤压至EP管中。

2)吸取10 μL(1)中液体,加入20 μLRapid  DNA-Lysis

3混匀。

4置于55℃作用5分钟加入100μL样品稀释液,混匀取上清。

4.  提取对照的处理

1)在上述1,2,3样品处理的同时,取10 μL(生理盐水、PBS或水)加入20 μL Rapid DNA-Lysis

2混匀。

3置于55℃作用5分钟加入100μL样品稀释液,混匀取上清。

二、在DNase free 的离心管中配制荧光定量PCR反应体系


阴性对照(20 μL

待检样品(20 μL

阳性对照(20 μL

提取对照(20μL

荧光 PCR反应液

18 μL

18 μL

18 μL

18 μL

待检样品

-

2 μL

-

-

阳性对照

-

-

2 μL

-

阴性对照

2 μL

-

-

-

提取对照

-

-

-

2 μL

三、按照以下方法设定荧光定量PCR反应

步骤

温度

时间

循环数

污染消化

37oC

2min

1

预变性

95 oC

2min

1

变性

95 oC

10 s

40

退火延伸

60 oC

30s

设置荧光基团为Fam,淬灭基团为BHQ,参比基团为None。退火延伸步骤中采集荧光数据。

四、结果判定

阳性对照:Ct<35且有明显扩增曲线,呈典型的S型曲线。

阴性对照:无Ct值,无明显扩增曲线,结果成立。

待检样品:Ct>40或无,则为阴性

35<Ct<40,且有S形扩增曲线,则为可疑。若无明显扩增曲线,则为阴性。可疑样品需重新处理样品后再次检测,若Ct<40且出现S形曲线,则为阳性,反之为阴性。

Ct35,且有明显的S形扩增曲线则为阳性。若扩增曲线呈不规则形状需重新检测。

 

注意事项

(1) 所有试剂应按照规定温度储存。请勿反复冻融。

(2) 检测过程应按照分区(试剂准备区、样本制备区、核酸扩增区)进行。各区物品专用,不得交叉使用,避免污染。

(3) 检测前后均需要对操作区进行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除剂等。耗材(包括吸头、PCR管)均需要无酶处理或使用商品化的无酶耗材。

(4) 为了避免对检测结果的影响,应避免使用含有荧光物质的手套,避免用手直接接触各项试剂,预防交叉污染。

(5) 采集全血时应当使用jv橼酸钠抗凝,而不要使用肝素EDTA

(6) 样品处理过程中应当防止交叉污染,推荐按照以下加样顺序加样,依次为阴性对照、待检测样本、阳性对照。

(7) 使用阳性对照时应特别注意防止污染。

(8) PCR反应完成后,用完的PCR管直接丢弃,严禁在实验室开盖,以防止气溶胶污染。

(9) 为防止试剂盒污染,请勿将不同批号试剂盒混用。


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