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0543-3202800病毒DNA核酸免提取试剂盒
试剂盒应用
本试剂盒采用zhuan利裂解液配方,有针对性的从组织、培养细胞、拭子、血液、尿液、唾液、环境样本中获得病毒DNA。裂解、提取和纯化只需10分钟。使用高效硅基DNA纯化柱,高效结合基因组DNA,从而获得纯度高,产量高的基因组DNA。提取的基因组DNA完整性高,适合PCR、qPCR、酶切、克隆等。
本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。
试剂盒组成
组分 | Col-D0601(50T) | 编号 |
裂解液DV | 35 mL | Col-D0601A |
洗涤液DVI | 25 mL | Col-D0601B |
洗涤液DVII | 12 mL | Col-D0601C |
洗脱液DV | 5 mL | |
DNA吸附柱 | 50套 | Col-D0601E |
备注:第一次使用前,在洗涤液DVII中加入48mL无水乙醇,并标记“√"和时间,避免重复加入。
保存条件
室温保存一年。
自备材料
水浴锅或金属浴、无水乙醇、无DNase和无RNase离心管
使用方法
1. 样本处理方法
1.1 从动物组织中提取
1.1.1 取20-100mg组织样本放入液氮中充分研磨,加入700μL裂解液DV,颠倒混匀。
或者取20-100mg组织样本加入700μL裂解液DV,加入1颗钢珠,放入组织研磨器中,研磨1-2分钟。
1.1.2 55℃孵育1分钟。12,000rpm离心1分钟。
1.1.3 取500μL上清加入250μL无水乙醇,充分混匀。按照步骤2.1-2.7进行操作。
1.2 从悬浮细胞中提取
1.2.1 细胞1,000rpm离心5分钟,收集细胞沉淀。
1.2.2 细胞数量<5×106个时,加入500μL裂解液DV。细胞数量为5×106~1×107个时,加入700μL裂解液DC。轻轻吹打混匀,55℃孵育1分钟。
1.2.3 12,000rpm离心1分钟。
1.2.4 细胞数量<5×106个时,取450μL上清。细胞数量为5×106~1×107个时,取650μL上清。
1.2.5 加入0.5倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤2.1-2.7操作。
1.3 从贴壁细胞中提取
1.3.1 yimei消化细胞后1,000rpm离心5分钟,收集细胞沉淀。
1.3.2 细胞数量<5×106个时,加入500μL裂解液DV。细胞数量为5×106~1×107个时,加入700μL裂解液C。轻轻吹打混匀,55℃孵育1分钟。
1.3.3 12,000rpm离心1分钟。
1.3.4 细胞数量<5×106个时,取450μL上清。细胞数量为5×106~1×107个时,取650μL上清。
1.3.5 加入0.5倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤2.1-2.7操作。
1.4 从血液、尿液、唾液、细胞上清液中提取
1.4.1 300μL样本中加入500μL裂解液DV。颠倒混匀,55℃孵育1分钟。
1.4.2 加入400μL无水乙醇,上下颠倒混匀。按照步骤2.1-2.7操作。
1.5 从拭子中提取
1.5.1 拭子置于700μL裂解液DV中,颠倒混匀,55℃孵育1分钟。
1.5.2 加入350μL无水乙醇,上下颠倒混匀。按照步骤2.1-2.7操作。
2. 提取步骤
2.1 全部加入DNA吸附柱中(如有需要可离心两次),12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中废液。
2.2 向DNA吸附柱中加入500μL洗涤液DVI,12,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。
2.3 向DNA吸附柱中加入500μL洗涤液DVII,12,000rpm离心30秒,倒掉收集管中废液。
2.4 重复步骤2.3一次。
2.5 12,000rpm离心2分钟,倒掉收集管中废液。
2.6 将DNA吸附柱放入新无DNase和无RNase离心管,加入30-50μL 洗脱液DV,室温放置1分钟。
2.7 12,000rpm离心2分钟,得到DNA溶液,-80℃保存。
注意事项
1. 经常更换手套,防止DNA污染。
2. 使用无DNase无RNase的吸头和离心管,防止DNA降解。
3. 常更换吸头,防止交叉污染。
4. 动作轻柔,防止基因组DNA断裂。
5. 为了提高洗脱效率,可提前将洗脱液C置于65℃水浴后再使用。
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