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鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测试剂盒

简要描述:鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测试剂盒取疑似病料(气管及分泌物、肾脏、肺脏等病毒靶组织),用PBS研磨成1:3悬液,在-20℃冻融1次,经12000 r/min离心3 min,上清液-20 ℃保存备用。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2022-04-07
  • 访  问  量:291
详情介绍

鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测试剂盒说明书

【用途】用于鸡传染性支气管炎病毒核酸的检测。

【规格】50T/

【试剂】

编号

数量(50T

保存

SR-I

10mL

室温

A

SR-II

25mL

室温

SR-

36mL

室温

SR-

18mL

室温

TU-1

3.75mL

室温

TU-2

2.5mL

室温

RT-PCR反应液

500uL

-20

B

酶混合液

50uL

-20

引物混合液

100uL

-20

阳性对照

30uL

-20

阴性对照

100uL

-20

ddH2O

1mL

-20

6xDNA Loading buffer

100uL

-20

Marker DL2000

50uL

-20

【操作步骤】

1.鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测试剂盒核酸提取  

(1) 取疑似病料(气管及分泌物、肾脏、肺脏等病毒靶组织),用PBS研磨成13悬液,在-20℃冻融1次,经12000 r/min离心3 min,上清液-20 ℃保存备用。

2200uL上清液,移入1.5mL灭菌EP管中,加入200uLSR-I漩涡振荡混合均匀静置5min

3)加75uL TU-1,漩涡振荡混合均匀,12000r/min离心5 min

4)将上清转移到新的2 ml离心管(试剂盒内提供)中,加入300 uL SR-,上下倒置6-8次,混合均匀。

5)将步骤4中的混合液移入制备管中(试剂盒内提供),并将制备管置于同一2 ml离心管,8000 r/min离心1min

6)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加500 uL SR-II,室温静置1min12000 r/min离心1 min

7)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加700 uL SR-12000 r/min离心1 min

8)将制备管置回到2 ml离心管中,12000 r/min离心2min

9) 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中(试剂盒内提供),在制备管膜中央加40 uL TU-2 室温静置1 min12000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板,即用或-20冻存备用。

2.One-Step RT- PCR加样体系(20uL体系)

RT-PCR反应液

10uL

引物混合液

2uL

酶混合液

0.8uL

ddH2O

模板

5.2uL

2uL

3.反应程序

1

50

45min


2

3

94预变性

94变性

5min

45 s


4

52退火

45 s

34个循环3~5步)

5

72延伸

45 s


6

72延伸

6min


7

4终止

5min


4.电泳

配制1.0%琼脂糖凝胶,取PCR产物5uL,混合1uL6xDNA Loading buffer加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加5uL DL2000 DNA Marker,在120-150v 电压下,1×TAE液中电泳15-20min,在紫外成像仪下观察结果。

【结果判定】

在约490bp左右位置出现扩增带,表明鸡传染性支气管炎病毒核酸检测阳性;

若在490bp处没有条带出现则样品判为阴性。

1.标准阳性片段M.DL2000 Marker

【注意事项】

1. 阳性对照极易污染试验环境,如果做阳性对照,吸取阳性对照枪头妥善处理

2. -20℃保存的试剂在使用前应*融化,振荡混匀后 8000rpm 离心 15 使液体全部沉于管底,置冰盒中取用。严禁使用超过有效期限的试剂;严禁混用不同试剂盒组分。

3. PCR 实验室应按功能分为配液区、样品处理区、扩增区、电泳区。物流方向依次为配液区 →样品处理区→扩增区→电泳区。所有接触病料的物品、器具,尤其是阳性对照及PCR 产物和使用后的电泳缓冲液均应合理处置,以免污染实验室。

4. 严格按照国标和说明书要求操作。吸取液体时移液器吸头尽量在液体上层吸取,移液精确;吸取不同液体时必须更换移液器滴头,防止试剂组分污染以及样品污染。

5.试剂盒组分在生产分装时考虑到液体的损耗,实际装量略多于标注装量,因此严禁直接在 原包装中配制反应体系,以免造成反应体系各组分比例不准确。

【保存期】本制品有效期为1年。

仅供兽医诊断使用


长期提供原核、真核蛋白表达构建服务

长期 提供抗原偶联、 HRP、生物素、糖基化、亲和素、FITC等偶联标记多肽、抗体、抗原、蛋白等服务


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