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牛羊口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒

简要描述:牛羊口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒1、洗涤液配制
将浓缩洗涤液(20×)用蒸馏水或去离子水稀释成洗涤液(1×),即1份浓缩洗涤液加入19份蒸馏水,配制的洗涤液(1×)作为洗板用。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2022-04-07
  • 访  问  量:525
详情介绍

牛羊口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒          

使用说明书

【产品名称】

通用名称:口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒

英文名称:Liquid-phase Blocking ELISA Kit for Detecting FMDV Type O Antibodies

【规格】96T×2

牛羊口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒用途】

检测牛、羊等血清中的口蹄疫O型抗体,适用于动物疫苗免疫抗体监测。

【储藏与有效期】28保存,有效期12个月。

【主要组份】

序号

组份名称

数量

1

FMDV-O抗原包被板

96T×2

2

HRP-OFMD单抗

12mL×1

3

样品稀释液

20mL×1

4

FMDV-O阴性对照

1.0mL×1

5

FMDV-O阳性对照

1.0mL×1

6

单组份TMB

12mL×1

7

终止液

12mL×1

8

浓缩洗涤液(20×)

50mL×1

9

说明书

1

【试验操作】

1、洗涤液配制

将浓缩洗涤液(20×)用蒸馏水或去离子水稀释成洗涤液(1×),即1份浓缩洗涤液加入19份蒸馏水,配制的洗涤液(1×)作为洗板用。

2、定性检测方案(单孔定性,每板检测92份血清样本)

【操作步骤】

2.1加样:设阴性对照血清(A1B1)和阳性血清(C1D1)2孔,直接加入50ul/孔对照血清;其它为被检样品孔,预先在相应孔内加入45ul的稀释液,接着加入5ul/孔待检血清;最后,在所有孔内均加入50ulHRP-OFMD单抗,被检血清即为120稀释。振荡,混匀,37℃温育30分钟。

2.2TMB底物:用洗涤液洗板3遍,最后一次拍干,加入TMB底物,50ul/孔,37℃温育15分钟。

2.3反应终止: 加入终止液,50ul/孔,终止反应。

2.4读值:酶标仪450nm波长读数。

【计算方法】

2.5阻断率计算

阴性对照平均值=(OD-A1+OD-B1/2;

阳性对照平均值=(OD+C1+OD+D1/2;

样品阻断 PI=[(阴性对照平均值-样品OD值)/阴性对照平均值]×100%

根据以上公式计算被检样品和阳性对照样品的阻断率。

  2.6试验成立

   两孔阴性对照OD450nm值至少一孔OD值大于0.5;两孔阳性对照至少一孔的阻断率大于60%。

【结果判定】

被检样品PI≥50%判为口蹄疫病毒O型抗体阳性;PI<50%判为口蹄疫病毒O型抗体阴性。

3检测方案(每板检测1020份血清样本)

在使用前,所有的试剂盒组份应恢复到室温。试剂应轻轻旋转或振荡混匀。每个样品使用一个单独的吸头。

3.1样品稀释: 取出FMDO抗原包被板,根据不同的需要,选择图1或图2中的一种布局进行操作。图1为可检测10份样品布局图;图2为可检测20份样品布局图。每次试验,每板均需设置阴阳性血清对照及4孔不加血清单抗对照。

以图1为例操作,A1A10每孔各75µL稀释液,其它所有孔内各加入50µL的稀释液。A1A10每孔各加25µL待检样品A1150µL的阳性对照,A1250µL的阴性对照,用排枪吹打混匀(每孔吹打35次),待检样品A1A10分别50µL/的量从AH连续2倍稀释;阳性对照A1150µL/的量从AH连续2倍稀释;阴性对照A1250µL/的量从AB连续2倍稀释。待检样品在第110列从1:4稀释至1:512;阳性对照,从1:2稀释至1:256,由于试剂盒提供的阳性对照已1:4稀释,则变为从1:8稀释至1:1024;阴性对照,从1:2稀释至1:4

3.2 加入HRPOFMD单抗:样品稀释好后,在所有孔内加入50ulHRPOFMD单抗,反应体系即为100µL/加样完毕后,所有稀释度翻倍,待检样品从1:81:1024,阳性对照从1:161:2048,阴性对照从1:41:8,贴封板膜,振荡混匀。将加好样的ELISA反应板置于37温育30分钟。

3.3洗板:230μL±20μL)洗涤液(1×)洗涤板孔,共洗涤3次。每次洗涤后应弃去孔内的液体。在最后一次洗涤液弃去后,将孔中残留的洗涤液拍干。50μL/孔加入TMB底物,37避光温育1015min

3.4读值: 每孔再加50μL终止液终止反应,立即在450nm波长下读取OD值。

1  96孔板检测10份样品布局图


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:8

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

1:16

1:4

B

1:16










1:32

1:8

C

1:32










1:64

空白

D

1:64










1:128

空白

E

1:128










1:256

不加血清单抗

对照

F

1:256










1:512

G

1:512










1:1024

H

1:1024










1:2048

2  96孔板检测20份样品布局图


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

S1 1:16

S2

S3

S4

S5

S6

S7

S8

S9

S10

1:16

1:4

B

1:32










1:32

1:8

C

1:64










1:64

空白

D

1:128










1:128

空白

E

S11 1:16

S12

S13

S14

S15

S16

S17

S18

S19

S20

1:256

不加血清单抗

对照

F

1:32










1:512

G

1:64










1:1024

H

1:128










1:2048

【结果分析】

3.5试验成立判断

不加血清单抗对照OD值应在2.0±1.5范围内;

阳性对照抗体效价不低于1:1024±1滴度;

阴性对照抗体效价应<1:8

3.6结果判定

不加血清单抗对照4孔,弃去最高和OD值,计算剩余2孔的平均OD值,再除以2,即得50%对照值,该值即为临界值,表示阻断50%反应的对照OD值。待检样品OD临界值判为阴性孔;待检样品OD临界值,判为阳性孔。每份待检样品系列梯度稀释中,阳性孔的最高稀释倍数即为该待检样品的抗体效价。若临界值处于两个稀释孔OD值之间,抗体效价取相邻阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间值。如临界值处于1:64(反对数值为1.8)与1:128(反对数值为2.1)之间,则判定该份待检样品的抗体效价为1:90(反对数值为1.95)。

抗体效价64,为疫苗免疫合格。

抗体效价计算对照表(反对数值)

抗体效价

Log10(效价)

对照计算

抗体效价

Log10(效价)

对照计算

抗体效价

Log10(效价)

对照计算

1:4

0.6

1:32

1.5

1:256

2.4

1:6

0.75

1:45

1.65

1:360

2.55

1:8

0.9

1:64

1.8

1:512

2.7

1:11

1.05

1:90

1.95

1:720

2.85

1:16

1.2

1:128

2.1

1:1024

3

1:22

1.35

1:180

2.25

1:1440

3.15

4、注意事项

4.1 为使您的实验获得正确结果,请您在实验前仔细阅读本说明书。

4.2 所有试剂使用前恢复至室温(1826),以免温度过低影响抗原抗体反应。

4.3实验前应用温度计检查温箱温度,温度过高或过低影响OD值高低。

4.4 包被板反应时严禁堆叠放置,应该平铺且板间有空隙,不要离温箱壁太近。

4.5实验所用移液器及设备应定期校准。

4.6采集的样品要新鲜,并且最好不要溶血。血清标本在28放置不要超过2天,室温不超过8小时,如需长时间放置应储存于-20

仅供兽医诊断使用    

长期提供原核、真核蛋白表达构建服务

长期 提供抗原偶联、 HRP、生物素、糖基化、亲和素、FITC等偶联标记多肽、抗体、抗原、蛋白等服务


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