氟苯尼考（Florfenicol）ELISA检测试剂盒

一、原理

氟苯尼考（Florfenicol）ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中氟苯尼考的残留量。

二、适用范围

定量检测猪尿样品中氟苯尼考的残留。

三、氟苯尼考（Florfenicol）ELISA检测试剂盒特点及技术指标

* 检 测 时 间 ： 50 min

试剂盒灵敏度： 1 ppb(µg/kg)

* 试剂盒检测纯阴性样本的背景值＜1ppb

试剂盒检测样本的灵敏度和准确度：

试剂盒特异性：

四、所需材料

仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、均质器、振荡器、离心机、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：单道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

试剂：去离子水

五、 试剂盒组成

*注：5个标准品浓度为：0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb，A、B各1 mL，C、D、E各0.5 mL，直接使用。

六、溶液配制

配液1: 洗涤工作液

   用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

配液2:  1×氟苯尼考样品稀释液     

   用去离子水将2×氟苯尼考样品稀释液按1:1体积比进行稀释，用于样本的稀释，配好后在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

七、样本前处理                                                   

样本处理前须知：

① 处理完的样品应及时进行下步检测，实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。

② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。

猪尿（稀释倍数：20）

猪尿需要用1×氟苯尼考样品稀释液稀释至20倍，取50 μL用于分析，若浑浊需要先离心取上层分析。

八、 酶标免疫测定程序

• 将所有所需试剂从冷藏环境中取出，待其*回升至室温后方可使用，根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~2小时。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
•  按标准品和样品双孔平行的数量使用微孔。
•  加标准品/样品、抗体：加标准品/样品50µL 到对应的微孔中，加入氟苯尼考抗体50µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应20min。
•  洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加入洗涤工作液300 µL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。
• 加酶标物：加入氟苯尼考酶标物100 µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光孵育20 min。
• 甩干孔内液体，重复洗板3次，后一次用吸水纸拍干。
• 显色：加入底物液A液50 µL/孔，再加底物液B液50 µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10min。
• 测定：加入终止液50µL/孔，用酶标仪立即  测定450/630nm处的吸光度值。

九、 结果判定

以标准品百分吸光率为纵坐标，以氟苯尼考标准品浓度（ppb）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中氟苯尼考实际浓度。（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）

十、 注意事项

① 根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~3小时，体积15毫升以上的优先从冷藏环境取出 回温。

②  洗板拍干后应立即进行下一步操作。

③ 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

④不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。

⑤ 0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色    时间为10min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到15-20min，反之则减短反应时间。

⑦ 底物液B液长期使用变为浅蓝色时，请放心使用，不影响检测结果。

十一、贮藏条件及保存期

    贮藏条件： 2～8℃

保 质 期： 12个月