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浅析黄曲霉毒素免疫亲和柱的提取步骤和净化步骤

 更新时间:2019-06-21    点击量:4499
 1、黄曲霉毒素免疫亲和柱的适用范围:  
    适合于陈皮、胖大海、僵蚕、酸枣仁、桃仁等中药材品种。*执行2010版中国药典附录IXV黄曲霉毒素测定法进行检测。  
2、黄曲霉毒素免疫亲和柱的提取步骤:  
    取供试品粉末约15.0g(过二号筛),精密称定,加入氯化钠3.0g,置于均质瓶中,精密加入70%甲醇溶液75.0mL,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11,000转/分),离心5分钟(离心速度2500转/分),定性滤纸过滤、然后精密量取上清液15.0mL,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,量取续滤液20.0mL,待净化。  
    混合对照品溶液的制备:精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备液。  
3、黄曲霉毒素免疫亲和柱的净化步骤:    
    1)回温解冻:提前半个小时将黄曲霉毒素免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻;  
    2)上样:准确移取20mL提取好的样品溶液注入免疫亲和柱,使溶液以1滴/S的速度通过免疫亲和柱,直至2mL-3mL空气通过柱体,弃去流出液;  
    3)淋洗:用20mL水淋洗免疫亲和柱,流速为1滴/s--2滴/s,淋洗两次。直至空气进入免疫亲和柱,直至2mL-3mL空气通过柱体,弃去全部的流出液,抽干小柱;  
    4)洗脱:准确加入1.0mL甲醇洗脱,流速约为1滴/s,收集全部的洗脱液于干净的离心管中,用甲醇-乙腈-水(40:18:42)定容至2mL,供液相色谱测定。  
 
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