浅析黄曲霉毒素免疫亲和柱的提取步骤和净化步骤

    适合于陈皮、胖大海、僵蚕、酸枣仁、桃仁等中药材品种。*执行2010版中国药典附录IXV黄曲霉毒素测定法进行检测。  

2、黄曲霉毒素免疫亲和柱的提取步骤：  

    取供试品粉末约15.0g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3.0g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75.0mL，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11,000转/分），离心5分钟(离心速度2500转/分)，定性滤纸过滤、然后精密量取上清液15.0mL，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，量取续滤液20.0mL，待净化。  

    混合对照品溶液的制备：精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。  

3、黄曲霉毒素免疫亲和柱的净化步骤：    

    1）回温解冻：提前半个小时将黄曲霉毒素免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻；  

    2）上样：准确移取20mL提取好的样品溶液注入免疫亲和柱，使溶液以1滴/S的速度通过免疫亲和柱，直至2mL-3mL空气通过柱体，弃去流出液；  

    3）淋洗：用20mL水淋洗免疫亲和柱，流速为1滴/s--2滴/s，淋洗两次。直至空气进入免疫亲和柱，直至2mL-3mL空气通过柱体，弃去全部的流出液，抽干小柱；  

    4）洗脱：准确加入1.0mL甲醇洗脱，流速约为1滴/s，收集全部的洗脱液于干净的离心管中，用甲醇-乙腈-水(40:18:42)定容至2mL，供液相色谱测定。