抗体纯化试剂盒说明书

抗体纯化试剂盒说明书

（单次纯化100mg-500mg抗体） 

一、 原理

蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。

二、适用范围

动物血清、腹水的浓缩、提纯。

三、抗体纯化特点

粗纯纯度＞90%；

精细纯度＞98%

四、试剂盒组成（可单次纯化100mg）

五、纯化步骤

（一）粗纯

①取待纯化抗体6ml，加入6ml磷酸盐缓冲液进行稀释,再加入12ml粗纯纯化液，摇匀1分钟；

②立即8000prm/min离心5min，弃去上清，得到沉淀物；

③加入复溶液，复溶。
（二）精细纯化

①亲和柱用去离子水洗去20%乙醇，再用结合液清洗2遍；

②用结合液稀释抗体浓度为1mg/ml，上样，控制流速为20秒/滴；

③抗体流完后加入原抗体等体积结合液冲洗柱内抗体；

④结合液流完后加入洗脱液，洗脱目的蛋白，取1.5ml离心管收集洗脱液得到抗体溶液；

⑤目的蛋白测蛋白浓度；

⑥用20%乙醇保存柱子，于4℃冰箱中保存，可反复使用10次以上。

七、 注意事项

①操作置于室温进行，所用溶液用前先回温，上样前均需要用0.2微米滤膜过滤。

②避免样品反复冻融和剧烈搅动，以防蛋白质的变性。

④精纯抗体上样前需要用0.2微米滤膜过滤。

⑤蛋白浓度不要高于1mg/ml。

⑥亲和柱在使用过程中，要求液体不能流干，基质中不得有气泡存在。

⑦上样前，样品需离心或用滤膜过滤，以防堵塞柱子。

⑧样品过渡裂解会引起蛋白变性，降低结合载量，采用温和的裂解方法，增加结合载量。需要控制上样和洗脱时流速让其有足够的吸附和分离时间，以便达到最大的结合载量。

⑨蛋白的性质、pH、温度等也会影响蛋白的结合载量。

八、贮藏条件及保存期

    贮藏条件：-4℃

保 质 期： 12个月