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时间分辨荧光微球(羧基)偶联使用方法

型 号

产品时间2021-12-14

所属分类动物疫病抗原抗体

报价

产品描述:时间分辨荧光微球(羧基)偶联使用方法微球的活化
各称取 20mg NHS 和 EDC,用标记缓冲液溶解,现用现配,即 20mg/ml NHS 和 EDC; 取 20ul NHS,加入到清洗后的微球中,快速混匀;
然后再取 5ul EDC 加入到微球中,快速混匀; 室温孵育,20-30min。

产品概述

时间分辨微球(羧基)偶联方法

粒径: 100nm-300nm

激发/发射:365/610nm

.  时间分辨荧光微球(羧基)偶联使用方法微球的清洗

一般取 1mg 微球(10mg/ml) 标记 0.1mg 抗体,不同项目可进行两边浓度摸索优化。

具体操作流程如下:

1.100ul 微球 + 900 ul 标记缓冲液50mM MES,pH 6.0或者0.05MPBS,pH 6.0

2.17000rpm,离心 20min,第一遍;

3.去掉上清,用 1000ul 标记缓冲液重悬微球;

4.17000rpm,离心 20min,第二遍;

5.去掉上清,用 1000ul 标记缓冲液重悬微球离心后微球重悬可使用水浴超声仪,建议功率 500-700W,超声时长 2-5min,下同,备用。

.  时间分辨荧光微球(羧基)偶联使用方法微球的活化

各称取 20mg NHS  EDC,用标记缓冲液溶解,现用现配,即 20mg/ml NHS  EDC; 20ul NHS,加入到清洗后的微球中,快速混匀;

然后再取 5ul EDC 加入到微球中,快速混匀; 室温孵育,20-30min。

.  清洗去除残留 EDC将活化后的微球:

1.17000rpm,离心 20min,第一遍;

2.去掉上清,用 1000ul 标记缓冲液重悬微球;

3.17000rpm,离心 20min,第二遍;

4.去掉上清,用 1000ul 标记缓冲液重悬微球,备用。

IV.  微球与抗体的偶联

0.1mg 抗体溶解于50mM MES,pH 8.5或者0.05MPBS,pH 8.5 2ml 离心管中,加入活化后的微球,快速混匀后,室温孵育,3 小时。

.  封闭

配制 20mg/ml  BSA,即称取 20mg BSA,用终浓度 100mM 乙醇胺溶液充分溶解,备用。

微球标记抗体后,加入 100ul 上述封闭液 BSA,室温孵育 1 小时。 .  去除未结合的抗体

此步骤目的是通过高速离心的方法去除游离的未结合微球的抗体;

具体流程如下:

1.17000rpm,离心 20min,第一遍;

2.去掉上清,用 1000ul 稀释液50mM PBS,pH 7.4  50mM Tris,pH 8.0)重悬微球;

3.17000rpm,离心 20min,第二遍;

4.去掉上清,用 1000ul 稀释液重悬微球,即为抗体-微球标记复合物,4℃放置备用, 如长期保存需加入终浓度为 0.2% BSA 和 0.02% NaN3 溶液。

 

注意事项

1. 保存条件:本产品需要于 2-8℃保存,切勿冷冻;

2. 本产品在使用前确认处于均匀的悬浮状态,有轻微结块可以用超声去除;

3. 本产品活化后建议立即进行偶联实验,活化状态不宜长时间保存;

4. 本产品仅供科研使用。


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