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小鼠抗血清ELISA效价测定检测试剂盒说明书

简要描述:小鼠抗血清ELISA效价测定检测试剂盒说明书配液: 洗涤工作液
用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释,用于酶标板的洗涤,洗涤工作液在4℃环境可保存一个月,用前一天取出回温。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2021-12-14
  • 访  问  量:322
详情介绍

小鼠抗血清ELISA效价测定检测试剂盒说明书

一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量

检测血清效价

二、适用范围

定量检测动物血清的效价

三、所需材料

仪器微孔板酶标仪450 nm/630 nm均质器、振荡器离心机、天平(感量0.01 g、离心管(5 mL, 50 mL

微量移液器:单道 1µL10 µL10 µL100µL

多道 50µL300µL

试剂:去离子水

小鼠抗血清ELISA效价测定检测试剂盒说明书

五、 试剂盒组成

 

序号

组成部分

96T装量

1

酶标板自备

12×8

2

酶标物

13 mL

3

底物A

7 mL

4

底物B

7 mL

5

终 止 液

7 mL

6

20×浓缩洗涤液

40 mL

7

血清稀释液

40 mL

六、溶液配制

配液: 洗涤工作液

   用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释,用于酶标板的洗涤,洗涤工作液在4℃环境可保存一个月,用前一天取出回温。

七、样本前处理                                                   

样本处理前须知:

① 处理完的样品应及时进行下步检测,实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。

② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。

血清(稀释倍数:10002000500010000

① 取血清按以上稀释倍数依次稀释10002000500010000混匀

100μL用于分析。

 酶标免疫测定程序

① 将所有所需试剂从冷藏环境中取出,待其*回升至室温后方可使用,根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~2小时。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

②  按标血清稀释液和样品双孔平行的数量使用微孔。

③  加血清稀释液/血清:加血清稀释液/血清100µL 到对应的微孔中,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37避光环境中反应30min

④  洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,

加入洗涤工作液300 µL/孔,每次静置20s,甩去孔内液体,重复洗涤3次,最后一次用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。

⑤ 加酶标物:加入酶标物100 µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37避光孵育30 min

⑥ .甩干孔内液体,重复洗板3次,最后一次用吸水纸拍干。

⑦ 显色:加入底物液A50 µL/孔,再加底物    

B50 µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37避光环境中反应10min

⑧ 测定:加入终止液50µL/孔,用酶标仪立即  测定450/630nm处的吸光度值。

、 结果判定

OD1.0标准。

血清稀释倍数2000OD1.0的判断为低效价,血清稀释倍数2000~5000OD1.0的为中等效价,血清稀释倍数5000OD1.0的为高等效价(详见试剂盒专业分析软件,以便进行大量样本的分析计算。)

、 注意事项

① 根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~3                                                          小时,体积15毫升以上的优先从冷藏环境取出 回温。

②  洗板拍干后应立即进行下一步操作

反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。

不使用过了有效期的试剂盒,不交换使用不同批号的试剂。

0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为10min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到15-20min,反之则减短反应时间。

⑦ 底物液B液长期使用变为浅蓝色时,请放心使用,不影响检测结果。

 未提及样本请致电本公司技术服务部。

十一贮藏条件及保存期

    贮藏条件: 28

保 质 期: 12个月

十二、问题与对策      

(见下页)

 

 

序号

现象

可能原因

解决方法

1

板条不显色或者无相应数值

试剂使用顺序混乱,或操作步骤出错

严格遵循实验说明重复实验

使用了不同批次的试剂

确保试剂来自同一试剂盒

板条受潮严重

板条要封好,干燥剂失效要及时更换

 

 

 

 

2

 

 

 

OD

 

试剂过期,或者不同的批次混用

查证过期试剂和批次

洗液配制错误、洗涤浸泡时间过长

按照说明书要求洗涤,并正确配制洗液

孵育时间过短

按照说明书要求,严格计算好时间

试剂污染

确保吸取不同液体更换新的枪头和盛放器皿

试剂温度过低

根据试剂体积大小回温时间相应延长,确保试剂*回温

使用错误波长读数,或者酶

标仪失灵

确保450nm波长读数,检查酶标仪是否故障

试剂盒处于的条件

使用完毕的部分请立即放回冰箱,勿置于过热环境时间太长

 

 

3

过高的

背景值或吸光度值

使用了质量差的水配制试剂

使用双蒸水或去离子水配制试剂

洗涤不当或者洗板机洗板效果不好

增加1-2洗涤,每孔至少加入250μL洗液

酶标仪失灵,如OD值读数很高而颜色很浅

使用校正微孔板检查酶标仪,检查光源

实验室温度过高,反应时间过长

测定操作温度是否合适,时间是否计算正确

试剂混淆,被污染或者配制不当

确保使用正确的试剂,准确配制,避免污染

 

4

 

差异性

加入标准品和样品的时间不一致

使用多道枪加样,同种试剂加样途中不能中断

多道枪使用不当

校准多道枪检查吸嘴是否套紧,确保吸液量一致

洗涤系统出现故障

检查洗涤系统,保持良好运行

 

 

 

5

 

板与板之间孵育时间相差太大

独立计时,确保一致的孵育时间

板与板之间不一致的洗涤过程

确保相同的洗涤次数,保证洗涤系统正常运作

使用移液枪不当

检查移液枪,确保吸取相同液量

试剂和样品处于不同温度

确保盒内试剂和样品液等充分回温,如果试剂体积较大则需要回温较长时间。不能用温水浴回温样品

不同批次的试剂混用,或试剂盒过期

试剂不要混用通常0标准品的OD值小于0.5显示试剂质量下降

 

 

6

一个或多个标准品数据点出曲线范围

标准品添加顺序混乱,或者放置于错误位置

按照说明要求重复实验,保证标准品添加正确。

标准品被污染或与其他标准品混淆

改用新的标准品,按照由低浓度到高浓度的顺序添加标准品

洗涤不一致或者洗涤系统失灵

遵循一如既往的洗涤方式,检查洗涤系统

加入标准品和试剂的时间不一致

由低到高浓度依次添加标准品,使用多道枪移液

多道枪使用不当

校准多道枪,检查吸嘴是否套紧,确保吸液量一致

 

 


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