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0543-3202800一、原理
赭曲霉毒素A ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量检测样品中赭曲霉毒素A的残留量。
二、适用范围
定量检测粮食、饲料等样品中赭曲霉毒素A的残留。
三、赭曲霉毒素A ELISA检测试剂盒特点及技术指标
* 检 测 时 间 : 30 min
* 试剂盒灵敏度: 0.2 pb(µg/kg)
* 样本处理方法简单,并与玉米赤霉烯酮前处理方法部分统一化,节省了人力物力;
* 试剂盒提供工作浓度标准品,使用更方便;
* 试剂盒检测样本的灵敏度和准确度:
样本 | 检测下限 | 回收率 |
粮食 | 10pb | 70%-120% |
饲料 | 10pb | 70%-120% |
试剂盒特异性:
药物名称 | 交叉反应率(%) |
赭曲霉毒素A | 100% |
玉米赤霉烯醇 | < 1% |
四、所需材料
仪器:微孔板酶标仪450 nm/630 nm、振荡器、离心机、刻度移液管(10 mL)、洗耳球、天平(感量0.01 g)、离心管(5 mL, 50 mL)
微量移液器:单道 1µL~10 µL、10 µL~100µL
多道 50µL~300µL
试剂:甲醇、去离子水。
五、 试剂盒组成
序号 | 组成部分 | 96T装量 |
1 | 赭曲霉毒素酶标板 | 12×8孔 |
2 | 赭曲霉毒素标准品*5 | 0.5-1 mL |
3 | 赭曲霉毒素酶标物 | 7 mL |
4 | 赭曲霉毒素抗体 | 7mL |
5 | 底物液A液 | 7 mL |
6 | 底物液B液 | 7 mL |
7 | 终 止 液 | 7 mL |
8 | 20×浓缩洗涤液 | 40 mL |
9 | 2×赭曲霉毒素样品稀释液 | 40mL |
*注:A、B、C、D、E 5个标准品浓度为:0ppb, 0.2ppb, 0.6ppb,1.8ppb, 5.4ppb,A、B标准品各1mL,其余各0.5mL,直接使用。
六:溶液配制
配液1: 洗涤工作液
用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释。配好的洗涤工作液在4 ℃环境可保存一 个月,用前一天取出回温。
配液2: 1×赭曲霉毒素样品稀释液
用去离子水将2×赭曲霉毒素样品稀释液按1:1体积比进行稀释。配好的1×赭曲霉毒素样品稀释液在4℃环境可保存一个月,用前一天取出回温。
配液3: 样品提取液
将甲醇与去离子水按V甲:V水=4:1 体积比配制成80%甲醇,即样品提取液。
七、样本前处理
样本处理前须知:
① 处理完的样品应及时进行下步检测,实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。
② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。
乳猪料、猪育肥料、全麦、牛饲料、玉米、DDGS(稀释倍数:100倍)
① 称取粉碎样品1.0 g ± 0.05 g至离心管中,加入 10 mL 样品提取液(配液3), 震荡提取1 min;
② 4000 r / min离心5 min;
③ 小心移取上清液100 μL 加到300μL1×赭曲霉毒素样品稀释液中, 混匀,取50 μL用于分析。
八、 酶标免疫测定程序
加入洗涤工作液250µL/孔,每次静置20s,甩去孔内液体,重复洗涤3次,后一次用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
液B液50µL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10min。
九、 结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标,以赭曲霉毒素A标准品浓度(ppb)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中赭曲霉毒素A实际浓度。(详见试剂盒专业分析软件,以便进行大量样本的分析计算。)
十、 注意事项
① 洗板拍干后应立即进行下一步操作。
② 反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
③ 不使用过了有效期的试剂盒,不交换使用不同批号的试剂。
④ 0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为10~15min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到20min,反之则减短反应时间。
⑥ 未提及样本请致电本公司技术服务部。
十一、贮藏条件及保存期
贮藏条件: 2~8℃
保 质 期: 12个月
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