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玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的制备方法有哪些?

 更新时间:2024-06-16    点击量:34
  玉米赤霉烯酮免疫亲和柱是一种实验室分离、纯化、检测玉米赤霉烯酮的常用工具。赤霉烯酮是一种由真菌产生的毒素,它的存在可能导致玉米等农作物的大量死亡,而且容易引起人畜的食物中毒,因此需要对其进行检测。
 
  玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的制备方法主要包括以下几个步骤:
 
  1、选择抗体:首先需要选择一种对玉米赤霉烯酮具有高亲和力和特异性的抗体。这种抗体可以通过筛选杂交瘤细胞库或者通过基因工程手段获得。
 
  2、抗体固定化:将选定的抗体通过化学键合或者物理吸附的方式固定在载体上。常用的载体有琼脂糖、硅胶、聚苯乙烯等。固定化的方法包括共价键合、离子键合、疏水作用、金属螯合等。其中,共价键合法是常用的方法,如使用溴化氰活化的琼脂糖凝胶作为载体,将抗体通过其氨基与载体上的活性基团发生反应,实现抗体的固定化。
 

玉米赤霉烯酮免疫亲和柱

 

  3、装柱:将固定化抗体的载体填充到柱子中,形成一个免疫亲和柱。柱子的大小和形状可以根据实际需求进行调整。装柱时要保证载体在柱内的分布均匀,避免出现空洞或者堆积现象。
 
  4、封闭非特异性结合位点:为了减少非特异性吸附,需要在柱子中加入一定浓度的封闭剂,如牛血清白蛋白、明胶等。封闭剂可以与载体上的非特异性结合位点结合,从而降低背景噪音。
 
  5、样品处理:将含有玉米赤霉烯酮的样品经过适当的前处理,如离心、过滤、稀释等,使其适应要求。然后将处理后的样品加入到玉米赤霉烯酮免疫亲和柱中,使玉米赤霉烯酮与固定化的抗体发生特异性结合。
 
  8、免疫亲和柱的再生:为了延长其使用寿命,需要进行再生处理。通常采用高浓度的盐溶液或者酸碱溶液对柱子进行清洗,去除残留的杂质和抗体。再生后的可以重复使用多次。
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