欢迎来到山东绿都生物科技有限公司网站!

0543-3202800
关键词搜索: 疫苗、兽药,食品安全检测抗原抗体试剂盒 、亲和柱、检测卡、生产原材料,动物疫病检测抗原抗体检测卡试剂盒
News新闻中心
首页 > 新闻中心 > 分析鼠抗β-内酰胺类单克隆抗体的制备流程

分析鼠抗β-内酰胺类单克隆抗体的制备流程

 发布时间:2020-06-19    点击量:562
   鼠抗β-内酰胺类单克隆抗体的制备流程:
  1、动物免疫将9只雌性Balb/C小鼠分为3组,高、中和低3个剂量组每次免疫分别为200,100和50μg/只。*免疫取相应剂量的β-内酰胺酶,溶于50μl0.1mol/LTris-HCL(pH7)中,于等体积的弗氏*佐剂充分乳化后小鼠后颈背部多点注射。两周后使用同剂量免疫原与弗氏不*佐剂乳化作第2次免疫,于腹腔皮下注射。第
  3次免疫后,ELISA法检测小鼠抗血清的效价。在3组中选取效价高的小鼠做融合,融合前3d腹腔注射相同剂量的抗原液作加强免疫。
  2、SP2/0骨髓瘤细胞的培养用8-氮杂鸟嘌呤(20μg/mL)处理3代体外培养的SP2/0骨髓瘤细胞,对数生长期时皮下注射Balb/C小鼠背部两侧,每只小鼠注射5×105~1×106个细胞。实体瘤直径长至2~3cm时,无菌解剖摘取,200目的筛网研磨过滤,重新培养至细胞稳定生长。
  3、细胞融合融合前1d使用鼠培养饲养细胞。取对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞,用50%PEG2000按常规方法融合,使用建立的青霉素酶间接ELISA法检测培养上清。选择强阳性孔,用有限稀释法连续亚克隆4~5次,直至克隆孔100%分泌抗β-内酰胺酶抗体。将建立的稳定、高效价分泌鼠抗β-内酰胺类单克隆抗体的杂交瘤细胞株扩增培养,传3代及冻存复苏后仍能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,然后置液氮中保存。
  4、腹水抗体的制备采用体内诱生法制备腹水。取Balb/C小鼠腹腔注射灭菌石蜡油0.5mL/只,两周后注射抗β-内酰胺酶的杂交瘤细胞5×105个/只,1周后收集小鼠腹腔液。
    以上内容仅供参考,更多具体数据请咨询本站客服。
扫一扫,关注微信
地址:山东省滨州市黄河二路169号 传真:86-0543-3405352
版权所有 © 2023 山东绿都生物科技有限公司  备案号:

联系我们

contact us

武经理

咨询电话

18266598399

扫一扫,关注我们

返回顶部