分析鼠抗β-内酰胺类单克隆抗体的制备流程

　　1、动物免疫将9只雌性Balb/C小鼠分为3组，高、中和低3个剂量组每次免疫分别为200，100和50μg/只。*免疫取相应剂量的β-内酰胺酶，溶于50μl0.1mol/LTris-HCL（pH7）中，于等体积的弗氏*佐剂充分乳化后小鼠后颈背部多点注射。两周后使用同剂量免疫原与弗氏不*佐剂乳化作第2次免疫，于腹腔皮下注射。第

　　3次免疫后，ELISA法检测小鼠抗血清的效价。在3组中选取效价高的小鼠做融合，融合前3d腹腔注射相同剂量的抗原液作加强免疫。

　　2、SP2/0骨髓瘤细胞的培养用8-氮杂鸟嘌呤（20μg/mL）处理3代体外培养的SP2/0骨髓瘤细胞，对数生长期时皮下注射Balb/C小鼠背部两侧，每只小鼠注射5×105～1×106个细胞。实体瘤直径长至2～3cm时，无菌解剖摘取，200目的筛网研磨过滤，重新培养至细胞稳定生长。

　　3、细胞融合融合前1d使用鼠培养饲养细胞。取对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞，用50％PEG2000按常规方法融合，使用建立的青霉素酶间接ELISA法检测培养上清。选择强阳性孔，用有限稀释法连续亚克隆4～5次，直至克隆孔100％分泌抗β-内酰胺酶抗体。将建立的稳定、高效价分泌鼠抗β-内酰胺类单克隆抗体的杂交瘤细胞株扩增培养，传3代及冻存复苏后仍能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，然后置液氮中保存。

　　4、腹水抗体的制备采用体内诱生法制备腹水。取Balb/C小鼠腹腔注射灭菌石蜡油0.5mL/只，两周后注射抗β-内酰胺酶的杂交瘤细胞5×105个/只，1周后收集小鼠腹腔液。

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