动物疫病检测常用的技术有哪些?

动物疫病检测常用技术，按检测目标可分为两大类：病原学检测（查病原体本身）和血清学检测（查抗体，反映感染/免疫状态）；再按技术原理与应用场景，可分为快速筛查技术、精准确诊技术和传统经典技术。下面按实用性和普及度，从常用到专业，逐一说明。

 

一、病原学检测技术（直接查病毒/细菌/寄生虫等）

 

1.快速筛查类（现场/基层首选，快、简、成本低）

 

（1）胶体金免疫层析技术（试纸条/快速卡）

 

原理：抗原-抗体特异性结合，在膜上形成可见色带。

 

常用疫病：非洲猪瘟、口蹄疫、猪瘟、蓝耳、新城疫、禽流感、布病、弓形虫等。

 

特点：

 

优点：10–20分钟出结果、无需仪器、操作简单、适合现场/基层初筛。

 

缺点：灵敏度/特异性低于PCR，不能单独作为重大疫病确诊依据，仅用于初筛。

 

判定：C线（质控）+T线（检测）显色=阳性；仅C线=阴性；C线不显色=无效。

 

（2）普通PCR（常规PCR）

 

原理：体外扩增病原特异性核酸片段，电泳观察条带。

 

常用疫病：多数病毒病（猪瘟、蓝耳、禽流感、新城疫、口蹄疫等）、细菌病（布病、副猪嗜血杆菌等）。

 

特点：

 

优点：灵敏度高、特异性强，可区分病原型/亚型。

 

缺点：需PCR仪+电泳，耗时约2–4小时，不能定量。

 

判定：出现与阳性对照一致的特异性条带=阳性；无条带=阴性。

 

2.精准确诊类（实验室核心，用于复核/确诊/定量）

 

（1）实时荧光定量PCR（qPCR/Real-timePCR）

 

原理：PCR过程中实时监测荧光信号，通过Ct值判定并定量。

 

常用疫病：非洲猪瘟、口蹄疫、高致病性禽流感、猪瘟、蓝耳、伪狂犬、细小病毒等重大/优先防控疫病。

 

特点：

 

优点：灵敏度最高、特异性强、可定量、防污染、结果客观，是目前病原检测金标准级技术。

 

缺点：仪器昂贵、试剂成本高、需专业人员。

 

判定：Ct≤规定阈值（如35/38）=阳性；Ct>阈值=阴性；临界Ct=疑似，需复检。

 

（2）数字PCR（dPCR）

 

原理：将反应体系微滴化，单分子扩增，绝对定量。

 

应用：极低载量病原检测（如早期感染、潜伏感染）、病毒载量精确定量、转基因/病原分型。

 

特点：比qPCR更灵敏、抗干扰强，但成本更高，多用于科研/精准诊断。

 

（3）病毒分离/细菌分离培养

 

原理：用细胞/鸡胚/培养基培养病原，观察CPE（细胞病变）/典型菌落，再鉴定。

 

常用疫病：

 

病毒：口蹄疫、禽流感、新城疫、猪瘟、蓝耳等（需细胞/鸡胚）。

 

细菌：猪链球菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、布氏杆菌等（需培养基）。

 

特点：

 

优点：获得活病原，是确诊金标准，可用于致病性试验、疫苗研发、药敏试验。

 

缺点：耗时最长（病毒3–7天，细菌1–3天）、操作复杂、生物安全要求高。

 

判定：出现典型CPE/菌落+生化/血清/分子鉴定确认为目标病原=阳性；盲传2–3代无阳性=阴性。

 

（4）基因测序（一代/二代测序）

 

原理：测定病原核酸序列，与数据库比对，确定病原种类/亚型/变异株。

 

应用：病原鉴定、分型、溯源、变异监测（如禽流感H5/H7亚型、口蹄疫型/亚型、非洲猪瘟变异株）。

 

特点：结果最准确，可发现新病原/变异株，但成本高、周期长（1–3天），多用于疫情溯源与科研。

 

3.其他病原学技术

 

（1）免疫荧光技术（IFA/间接免疫荧光）

 

原理：荧光标记抗体与病原结合，荧光显微镜下观察特异性荧光。

 

应用：病毒（如猪瘟、蓝耳、伪狂犬）、细菌（如布病）的细胞/组织切片检测，可定位病原。

 

特点：特异性强，可直观观察病原位置，需荧光显微镜。

 

（2）免疫组化（IHC）

 

原理：酶标记抗体，显色反应定位组织中的病原。

 

应用：病理组织中病原定位（如非洲猪瘟、猪瘟、伪狂犬的组织检测），结合病理诊断。

 

（3）电镜技术（EM）

 

原理：电子显微镜直接观察病毒形态。

 

应用：未知病毒初步鉴定、病毒形态学观察（如冠状病毒、轮状病毒）。

 

特点：直观，但灵敏度低、设备昂贵、操作复杂，多用于科研。