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鼠抗链霉素单克隆抗体的制备流程是怎样的?

 更新时间:2024-04-07    点击量:247
  鼠抗链霉素单克隆抗体的制备是一个涉及免疫学、细胞生物学和分子生物学等多个学科的复杂过程。以下是其基本流程:
 
  1、抗原制备与纯化:首先,需要获取高纯度的链霉素作为抗原。确保抗原的纯度和活性是关键,因为不纯的或失活的抗原可能导致产生的抗体与非目标分子发生交叉反应。
 
  2、动物免疫:选择一个合适的小鼠品种进行免疫。通过皮下或腹腔注射抗原,通常与佐剂混合以增强免疫反应。可能需要多次加强免疫以确保获得足够的抗体滴度。
 
  3、检测血清抗体滴度:在免疫过程中,定期从小鼠尾部取血,使用ELISA或其他方法检测血清中的链霉素特异性抗体滴度。当达到满意的滴度时,可以进行下一步。
 
  4、融合实验:将产生高滴度抗体的小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞(如SP2/0)融合,形成杂交瘤细胞。这一步骤通常使用PEG(聚乙二醇)或电融合技术。
 
  5、选择和筛选:将融合后的杂交瘤细胞种植在含有HAT培养基的96孔板中。只有成功融合并具有生长能力的杂交瘤细胞才能在这种选择性培养基中存活。
 
  6、阳性克隆的筛选与扩增:使用ELISA或其他方法对杂交瘤细胞产生的抗体进行筛选,找到能够特异性识别链霉素的克隆。将阳性克隆转移到更大的培养容器中进行扩增。
 
  7、单克隆抗体的纯化:当杂交瘤细胞数量足够时,可以收集培养液并从中纯化。常用的纯化方法有蛋白A柱层析法。
 
  8、验证单克隆抗体的性质:使用多种技术来验证特异性、亲和力和其他性质。
 
  9、扩大生产与储存:根据需要,可以在体外大规模培养杂交瘤细胞来生产更多的鼠抗链霉素单克隆抗体,或将其冷冻保存以备后用。
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