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鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体的相关知识,快来看看

 更新时间:2020-11-25    点击量:818
   蓖麻毒素是一种植物蛋白毒素,其来源广泛,毒性大,产率高,容易制备,可大量生产。可能成为一种潜在的军用毒剂。蓖麻毒素相对分子质量约为64000,具有免疫原性,经减毒后即可在动物体内产生相应的抗体。
  鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体并鉴定其特性.方法以甲醛处理的蓖麻毒素毒蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等方法筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行单抗的纯化,并对鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体的特异性进行鉴定。
  根据蓖麻毒素的作用机制,可以从抗体及小分子拮抗剂方面阻断蓖麻毒素发挥其毒性作用。文献报道抗蓖麻毒素B链的抗体可以通过阻断蓖麻毒素与细胞表面半乳糖受体的结合,从而阻断蓖麻毒素进入细胞,抗蓖麻毒素A链的抗体能够通过与N_糖苷酶的活性位点特异结合,阻断蓖麻毒素A链的RNA酶的活性,防止其酶解RNA,进而阻止其发挥细胞毒性作用,故此可以作为良好的Ricin中毒后的解毒剂。到目前为止,文献中提到的具有中和活性的Ricin抗体所识别的表位均处于A链或B链上相应的活性位点中。本文的抗蓖麻毒素A链单克隆抗体所识别的表位均处于A链的活性位点以外,但在体内外均有针对蓖麻毒素的中和保护作用。
  为了建立免疫层析技术定量检测蓖麻毒素试剂,首先依据蓖麻毒素对半乳糖的特异性结合能力,采用亲和层析技术对蓖麻种子进行亲和层析纯化;其次采用凝胶过滤层析技术,获得更纯的天然蓖麻毒素纯品;后以天然的蓖麻毒素脱毒为免疫原,分别免疫获得鼠抗相思中毒素单克隆抗体和兔抗蓖麻毒素多克隆抗体,利用获得的鼠抗蓖麻毒素单克隆抗体作为标记抗体。
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