呕吐毒素免疫亲和柱的净化检测方法及需要注意的地方

　　呕吐毒素免疫亲和柱测定的原理

　　本产品测定的基础是抗原抗体反应，抗呕吐毒素(DON)的单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的DON经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过DON免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，DON与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。z后采用甲醇洗脱DON，然后进行相关分析。

　　净化过程

　　注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!

　　3mL柱管取出上方堵头，减去上堵头螺纹下突出部分，插回柱子上，另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象，不影响亲和柱的使用);

　　准确移取上述混匀滤液，注入针筒中，调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过免疫亲和柱;

　　用20mL水冲洗柱子(对于饲料及玉米加工副产品等颜色较深的样液，先用10mL0.1%吐温20-PBS清洗，再用10mL10%甲醇-水冲洗柱子，z后用10mL水冲洗柱子。)，流速1秒/滴，弃去流出液，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体;

　　准确加入1.5mL甲醇(色谱级)洗脱，流速自然重力，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液，进行相关测定。

　　呕吐毒素免疫亲和柱的检测方法

　　IAC-HPLC法检测

　　过有机滤膜(孔径0.22μm)后，直接HPLC测定;或在50℃下用氮气缓缓地吹至近干，加入流动相混匀，过有机滤膜(孔径0.22μm)后，参照GB5009.111-2016或GB/T30956-2014条件进行HPLC测定。

　　使用注意事项

　　(1)呕吐毒素对人体有害，应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次氯酸钠浸泡过夜。

　　(2)不要使用过有效期的免疫亲和柱。

　　(3)免疫亲和柱应在2~8℃保存。不要冷冻。

　　(4)使用前，免疫亲和柱需至少提前半小时回温至室温(25℃左右)。

　　(5)HPLC液相测定值、试剂盒计算值接近z高检出值时，样本的实际含量可能大于柱容量而造成流穿，建议减少上样体积重新过柱。

　　(6)称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议z低不少于10g样。

　　以上便是今天关于呕吐毒素免疫亲和柱的净化检测方法及需要注意的地方的全部分享了，希望对大家今后使用本设备能有帮助。