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快速RNA免提取SYBR Green荧光PCR检测试剂盒

简要描述:本试剂盒中采用du特配方,能够快速高效的裂解各种常见样本,无需重复离心便可获得高质量的病毒RNA,适用于以RNA为模板的定量PCR的检测。本产品可用于细胞培养液、血液、血清中病毒RNA的提取。

  • 产品型号:
  • 厂商性质:生产厂家
  • 更新时间:2023-04-27
  • 访  问  量:277
详情介绍

快速病毒RNA免核酸提取

SYBR Green荧光PCR检测试剂

 

试剂盒简介:本试剂盒中采用du特配方,能够快速高效的裂解各种常见样本,无需重复离心便可获得高质量的病毒RNA,适用于以RNA为模板的定量PCR的检测。本产品可用于细胞培养液、血液、血清中病毒RNA的提取。

 

试剂盒组成

组分

M-DNA01

RNA-Lysis

         1.5 mL      50T

2×one step SYBR Green Mix

200 μL       ( 50T )

SYBR Green Enzyme

50 μL         ( 50T )

样品稀释液

20  ml         ( 50T )

保存-20ºC 保存,保存期一年。

注意:使用前将RNA-Lysis室温充分混匀。

准备的仪器:离心机、移液器、PCR仪

使用方法

一、 样品的处理方法

1.少量样本处理方法

1吸取15μL样本放入1.5ml离心管中。

2)加入25 μL RNA Lysis

3)充分混匀,室温静置5分钟,加入350µL样品稀释液混匀。

410,000rpm离心1分钟,1-2μL作为PCR反应模板。

2.大量样本处理方法

1分别吸取15μL不同的样本依次放入8联管中。

2)加入25 μL RNA Lysis

3)充分混匀,室温静置5分钟10,000rpm离心1分钟

4分别从(3)中吸取10μL处理后样品依次加入一新的8联管。

5每孔分别加入90µL样品稀释液混匀。取1-2μL作为荧光PCR反应模板。

二、在RNase free 的离心管中配制PCR反应体系(以ROCH 480 为测试机型)

PCR反应体系

20 μL体系(推荐)

2×one step SYBR Green Mix

10 μL

SYBR Green Enzyme

1μL

Forward Primer (10 μM)

0.4-1μL

Reverse Primer (10 μM)

0.4-1 μL

Template RNA

1-2 μL

ddH2O

补足至20 μL

 

三、反应程序


温度

时间

循环数

逆转录

50ºC

15min

1

预变性

95ºC

30sec

1

循环反应

95ºC

10sec

 

40-45

60ºC

30sec

 

溶解曲线

95ºC

5sec

1

55ºC

1min

1

97ºC

-

1

     对于有复杂结构的模板,可以将逆转录温度提高到55ºC,有助于提高扩增效率;

延伸时间请根据使用仪器所需要的数据采集最短时间进行调整;

溶解曲线的设定,根据仪器的默认采集程序设定即可。

 

注意事项

1)在进行大量样品检测时,可将本试剂盒的试剂预分装到8 PCR管,用多通道移液器进行多样本的处理。

2)取样的细胞量应当适中,浓度不宜过高或过低,处理后溶液应当以透明为宜。扩增病毒基因时需要根据病毒的滴度决定取样的细胞数量。

3)样品处理过程中应当防止交叉污染,推荐设置阴性样品参与处理过程,以检测环境的污染。

4)PCR的退火温度可根据引物的预测Tm值减去5℃,或者通过梯度PCR摸索最佳退火温度。

5)用本试剂盒处理的样品可于-20℃保存 1个月。

6)为防止试剂盒污染,请勿将不同批号试剂盒混用。


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