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解读鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备方法

 更新时间:2023-03-08    点击量:359
  黄曲霉毒素在自然界分布的黄曲霉中,约有20%的菌株能产生黄曲霉毒素。其中花生、玉米、黄豆及棉籽等作物与其副产品易感染黄曲霉毒素,含黄曲霉毒素量较多,食入后在动物体内主要存在于如肝脏、尿与粪便中。黄曲霉毒素是一种肝脏毒素,能引起肝细胞变质、坏死、出血;目前,黄曲霉毒素的酶联免疫法,免疫胶体金法等检测方法均需要黄曲霉毒素抗原抗体。
 
  黄曲霉毒素B1(AFB1)是具有强致癌性的极毒物质。在湿热条件下,花生、玉米、混合饲料等粮油作物霉变后AFB1的污染频率较高,是对人类和畜牧危害最大的真菌毒素。该法属于目测半定量,检测精度低,而且操作复杂,需要使用标准品。
 
  鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备方法:
 
  (1)黄曲霉毒素半抗原合成
 
  20-100mg黄曲霉毒素溶于丙酮中,10%硫酸中,于60℃搅拌反应,3h后,蒸干丙酮,洗涤4次,蒸干后得到黄曲霉毒素半抗原。
 
  (2)黄曲霉毒素全抗原(人工抗原、抗原、酶标抗原)合成
 
  将黄曲霉毒素半抗原与牛血清白蛋白偶联得到免疫抗原。
 
  取60mg牛血清白蛋白溶于9.5mlPBS(0.01mol/L,pH5.0)溶液中,加入50微升室温搅拌1h,用0.01mol/LPBS透析3天,每天换3次透析液,得到黄曲霉毒素与牛血清白蛋白的免疫抗原。
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