解读鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备方法

　　黄曲霉毒素在自然界分布的黄曲霉中，约有20%的菌株能产生黄曲霉毒素。其中花生、玉米、黄豆及棉籽等作物与其副产品易感染黄曲霉毒素，含黄曲霉毒素量较多，食入后在动物体内主要存在于如肝脏、尿与粪便中。黄曲霉毒素是一种肝脏毒素，能引起肝细胞变质、坏死、出血；目前，黄曲霉毒素的酶联免疫法，免疫胶体金法等检测方法均需要黄曲霉毒素抗原抗体。
 

　　黄曲霉毒素B1(AFB1)是具有强致癌性的极毒物质。在湿热条件下，花生、玉米、混合饲料等粮油作物霉变后AFB1的污染频率较高，是对人类和畜牧危害最大的真菌毒素。该法属于目测半定量，检测精度低，而且操作复杂，需要使用标准品。
 

　　鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备方法：
 

　　(1)黄曲霉毒素半抗原合成
 

　　20-100mg黄曲霉毒素溶于丙酮中，10%硫酸中，于60℃搅拌反应，3h后，蒸干丙酮，洗涤4次，蒸干后得到黄曲霉毒素半抗原。
 

　　(2)黄曲霉毒素全抗原(人工抗原、抗原、酶标抗原)合成
 

　　将黄曲霉毒素半抗原与牛血清白蛋白偶联得到免疫抗原。
 

　　取60mg牛血清白蛋白溶于9.5mlPBS(0.01mol/L,pH5.0)溶液中，加入50微升室温搅拌1h，用0.01mol/LPBS透析3天，每天换3次透析液，得到黄曲霉毒素与牛血清白蛋白的免疫抗原。