鼠抗重金属类单克隆抗体的制备方法介绍

　　鼠抗重金属类单克隆抗体的制备方法：
 

　　1、制胶及上样
 

　　(1)配制12%SDS-PAGE分离胶，混匀后注入边条厚度为2mm的两块洁净玻璃板间，其上加一薄层异丙醇，室温下静置至凝固。
 

　　(2)待分离胶*聚合后，倾去其上的水层，以吸水纸吸净残余液体，插入加样梳，缓缓加入浓缩胶，使其充满加样梳间的空隙，室温下静置。待胶*聚合。
 

　　(3)将凝胶固定于电泳装置上，上、下槽加入电泳缓冲液。
 

　　(4)小心拔去加样梳，使加样孔竖直，以电泳缓冲液冲洗加样孔数次。
 

　　(5)分别取50µg蛋白量的细胞总蛋白样品及蛋白质分子量Marker，按4：1体积比加入5´样品缓冲液，以1´样品缓冲液?配平上样体积后，于沸水浴中煮3min使蛋白变性。
 

　　(6)将处理好的样品按照预定的顺序加入分离胶的上样孔中。
 

　　2、电泳
 

　　(1)接通凝胶电泳仪的电源，初始电压70V。
 

　　(2)溴酚蓝染料的前缘进入分离胶上缘后提高电压至160V，继续电泳直至溴酚蓝泳出分离胶的下缘。(约60分钟)
 

　　3、转膜
 

　　(1)从玻璃板中取出凝胶，将其浸泡于转移缓冲液中。
 

　　(2)取与胶同样大小的硝酸纤维素膜，以95%乙醇浸泡5秒钟后浸泡于转移缓冲液5分钟以上待用。
 

　　(3)按顺序在转移夹内放置预先经转移缓冲液浸泡的海绵、三层滤纸、硝酸纤维素膜、凝胶、三层滤纸、海绵，保证每层之间没有气泡。