鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的鉴定与应用

　更新时间：2020-04-22 点击量：690

　　鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体存在于谷物、坚果、棉花籽及其他食品或饲料中，具有很强的致癌性，对人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。本抗体为黄曲霉毒素B1单克隆抗体，该抗体可应用于ELISA、胶体金、免疫亲和柱层析等免疫检测。

　　鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的鉴定：

　　(1)亚类鉴定：收集细胞培养上清，用免疫双扩散法鉴定免疫球蛋白亚类。

　　(2)杂交瘤细胞培养上清及腹水效价测定：用浓度为2.5mg/L的AFB-OVA包被酶标板，用间接ELISA法分别测出杂交瘤细胞培养上清及腹水效价。

　　(3)抗体亲和力常数测定：采用下面公式计算亲和常数Ka=(n--1)/(nA'-An).

　　Ka：相对亲和常数，A：包被抗原浓度为Ap时的半数吸光度，Ab：包被抗原浓度为Ag时的半数吸光度，n：Ag'与A。的比值

　　(4)抗体对标准毒素的灵敏度：首先确定3B3抗体的ELISA的反应条件，然后采用间接竞争法测定不同浓度的AFB1对抑制后的A值，抑制率=A/AoX100%，其中AO为优化条件下的吸光值绘制抑制率曲线，以抑制率50%时的AFB1的浓度为抗体检测AFB的灵敏度。

　　(5)抗体特异性检测：采用间接竞争法测定3种McAb与黄曲霉毒素Br，G，G2，M，的交叉反应。

　　鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的应用：

　　将纯化浓缩后的抗体与羧基微球在4C条件下偶联14h，然后填充亲和柱，将一系列浓度的黄曲霉毒素B标样过亲和柱，用75%甲醇洗脱后，用荧光光度计检测单克隆抗体免疫亲和柱截留的黄曲霉毒素B1。

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