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鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的鉴定与应用

 更新时间:2020-04-22    点击量:664
   鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体存在于谷物、坚果、棉花籽及其他食品或饲料中,具有很强的致癌性,对人和若干动物具有强烈的毒性,其毒性作用主要是对肝脏的损害。本抗体为黄曲霉毒素B1单克隆抗体,该抗体可应用于ELISA、胶体金、免疫亲和柱层析等免疫检测。
  鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的鉴定
  (1)亚类鉴定:收集细胞培养上清,用免疫双扩散法鉴定免疫球蛋白亚类。
  (2)杂交瘤细胞培养上清及腹水效价测定:用浓度为2.5mg/L的AFB-OVA包被酶标板,用间接ELISA法分别测出杂交瘤细胞培养上清及腹水效价。
  (3)抗体亲和力常数测定:采用下面公式计算亲和常数Ka=(n--1)/(nA'-An).
  Ka:相对亲和常数,A:包被抗原浓度为Ap时的半数吸光度,Ab:包被抗原浓度为Ag时的半数吸光度,n:Ag'与A。的比值
  (4)抗体对标准毒素的灵敏度:首先确定3B3抗体的ELISA的反应条件,然后采用间接竞争法测定不同浓度的AFB1对抑制后的A值,抑制率=A/AoX100%,其中AO为优化条件下的吸光值绘制抑制率曲线,以抑制率50%时的AFB1的浓度为抗体检测AFB的灵敏度。
  (5)抗体特异性检测:采用间接竞争法测定3种McAb与黄曲霉毒素Br,G,G2,M,的交叉反应。
  鼠抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的应用
  将纯化浓缩后的抗体与羧基微球在4C条件下偶联14h,然后填充亲和柱,将一系列浓度的黄曲霉毒素B标样过亲和柱,用75%甲醇洗脱后,用荧光光度计检测单克隆抗体免疫亲和柱截留的黄曲霉毒素B1。
  
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