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单抗制备-细胞融合筛选过程中遇到的问题及对策

 更新时间:2013-12-31    点击量:869

1,融合率低,阳性孔少
①免疫的问题。由于免疫原性不强或者免疫途径不当造成免疫弱,效价低。
②融合过程中温度、时间、PEG分子量,作用时间等。
③脾细胞是否取出了足够多的细胞,有无组织碎片干扰。
④融合前骨髓瘤细胞生长状态是否完好,细胞是否浑圆,透亮,成对数生长。


2,单抗亲和力整体低
①免疫的问题。免疫途径不当或者免疫原问题。
②融合细胞筛选过程出现遗漏,筛选方法不当或检测方法不当,造成没有筛到高亲和力的融合细胞。
③由于亚克隆细胞生长环境不合适,导致融合细胞染色体丢失,分泌特性改变,亲和力从高变低,这时就需要及时更换培养液,当细胞增长到一定密度的时候,培养基就开始变颜色,影响融合细胞的生长,造成染色体丢失;控制好细胞的密度,密度过大使新加入的培养基不至于很快被消耗,影响融合细胞的生长,造成染色体丢失;不要过于频繁操作细胞,当细胞生长密度不是很大的时候,不要频繁操作,否则细胞容易出现死亡或者生长形态发生明显变化。
操作细致,防止细胞被支原体等微生物污染。

3,抗体亲和力从高变低
①没有及时更换培养液,当细胞增长到一定密度的时候,培养基就开始变颜色,影响融合细胞的生长,造成染色体丢失或者性状改变。
②控制好细胞的密度,密度过大使新加入的培养基不至于很快被消耗,影响融合细胞的生长,造成染色体丢失或者性状改变。
③过于频繁操作细胞,当细胞生长密度不是很大的时候,不要频繁操作,否则细胞容易出现死亡或者生长形态发生明显变化。
④细胞被支原体等微生物污染。
⑤亚克隆次数超过5次,导致细胞生长环境经常被改变,弱的阳性杂交瘤细胞染色体丢失或者性状改变。

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