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ELISA试剂盒使用及开发过程中常见问题及对策

 更新时间:2013-12-17    点击量:3646

 

现象

可能原因

解决方法

板条不显色或者无相应数值

试剂使用顺序混乱,或操作步骤出错

严格遵循实验说明重复实验

使用了不同批次的试剂

确保试剂来自同一试剂盒

板条受潮严重

板条要封好,干燥剂失效要及时更换

OD

试剂过期,或者不同的批次混用

查证过期试剂和批次

洗液配制错误、洗涤浸泡时间过长

按照说明书要求洗涤,并正确配制洗液

孵育时间过短

按照说明书要求,严格计算好时间

试剂污染

确保吸取不同液体更换新的枪头和盛放器皿

试剂温度过低

根据试剂体积大小回温时间相应延长,确保试剂*回温

使用错误波长读数,或者酶

标仪失灵

确保450 nm波长读数,检查酶标仪是否故障

试剂盒处于的条件

使用完毕的部分请立即放回冰箱,勿置于过热环境时间太长

过高的

背景值或吸光度(OD值)

使用了质量差的水配制试剂

使用双蒸水或去离子水配制试剂

洗涤不当或者洗板机洗板效果不好

增加1-2次洗涤,每孔至少加入250μL洗液

酶标仪失灵,如OD值读数很高而颜色很浅

使用校正微孔板检查酶标仪,检查光源

实验室温度过高,反应时间过长

测定操作温度是否合适,时间是否计算正确

试剂混淆,被污染或者配制不当

确保使用正确的试剂,准确配制,避免污染

板内

差异性

加入标准品和样品等的时间不一致

使用多道枪加样,同种试剂加样途中不能中断

多道枪使用不当

校准多道枪,检查吸嘴是否套紧,确保吸液量一致

洗涤系统出现故障

检查洗涤系统,保持良好运行

板与板之间孵育时间相差太大

独立计时,确保一致的孵育时间

板与板之间不一致的洗涤过程

确保相同的洗涤次数,保证洗涤系统正常运作

使用移液枪不当

检查移液枪,确保吸取相同液量

试剂和样品处于不同温度

确保盒内试剂和样品液等充分回温,如果试剂体积较大则需要回温较长时间。不能用温水浴回温样品

不同批次的试剂混用,或试剂盒过期

试剂不要混用,通常0标准品的OD值小于0.5显示试剂质量下降

一个或

多个标准品数据点超出曲线范围

标准品添加顺序混乱,或者放置于错误位置

按照说明要求重复实验,保证标准品添加正确

标准品被污染或与其他标准品混淆

改用新的标准品,按照由低浓度到高浓度的顺序添加标准品

洗涤不一致或者洗涤系统失灵

遵循一如既往的洗涤方式,检查洗涤系统

加入标准品和试剂的时间不一致

由低到高浓度依次添加标准品,使用多道枪移液

多道枪使用不当

校准多道枪,检查吸嘴是否套紧,确保吸液量一致

 

 

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