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免疫亲和柱的原理与作用过程

 更新时间:2023-05-19    点击量:858
  一、免疫亲和柱(Immunoprecipitationcolumn)是一种常用的实验技术,用于从混合物中分离出特定的蛋白质或其他分子。免疫亲和柱通过利用抗体与特定分子的相互作用来实现选通性缓冲。
 
  二、作用过程:
 
  1.制备样品:将要检测的生物分子从细胞提取物、组织或其他样品中提取出来。这个步骤可能需要不同的方法,具体取决于你感兴趣的生物分子。
 
  2.准备免疫亲和柱:选择一个适当的免疫亲和柱,然后按照该柱的说明书进行准备。大多数免疫亲和柱都需要在使用前进行条件化,并且需要用缓冲液洗涤以去除未结合的成分。
 
  3.加入样品:将制备好的样品加入到免疫亲和柱中,使其流过柱。此时,免疫亲和柱内的抗体将会识别并结合目标蛋白质,并将其捕获到柱内。
 
  4.洗涤柱子:用带有盐和洗涤剂的缓冲液洗涤柱子,以去除非特异性结合,并使免疫亲和柱上的目标蛋白质保持其稳定性。
 
  5.瞬时沉淀:通过在免疫亲和柱中加入一个低pH缓冲液,可以使目标蛋白从抗体中释放出来。此时,目标蛋白质会形成沉淀,并可用于后续分析。
 
  6.分析样品:将瞬时沉淀的样品用于下一步分析。这可能是Westernblot、质谱或其他技术,具体取决于你要检测的生物分子。
 
  三、因为免疫亲和柱的高特异性,使用免疫亲和柱净化可以获得纯净的样品提取物,如同标准品般纯净的提取物可以用相对简单常见的检测方式获得准确的定量检测结果,这对于微量甚至痕量分析很重要。在样品净化过程中,使用亲和柱同时避免了常规液液萃取中大量有机溶剂的使用,加强了对实验员的保护。
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