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亲和柱、免疫亲和柱、柱层析之间的联系

 更新时间:2023-01-17    点击量:575
  一、将与纯化对象有专一结合作用的物质连接在不溶性载体上,制成亲和吸附剂后所装的柱,多用做亲和层析。
 
  二、柱层析技术(Columnchromatography)又称柱色谱技术,主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离开来。
 
  三、柱层析操作时,先在圆柱管中填充不溶性基质,形成一个固定相。将样品加到柱子上,用特殊溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中,根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离。
 
  四、湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂“走柱子”,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂“走柱子”,一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
 
  五、免疫亲和层析(IAFC)免疫亲和层析以抗原抗体中的一方作为配基亲和吸附另一方的分离系统称为免疫亲和层析。IAC也是色谱技术的一种,可称为免疫色谱技术,是一种利用抗原抗体特异性可逆结合特性的SPE技术,根据抗原抗体的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。主要原理是将抗体与惰性微珠共价结合,然后装柱,将抗原溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原,用适当的缓冲液和合适的保存方法,柱可以再生备用。
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