简单了解鼠抗T2-毒素单克隆抗体的常见问题

　　鼠抗T2-毒素单克隆抗体的常见问题：

　　1.包被抗体或抗原不适，易产生阳性值较小，或产生变异，即跳管现象。

　　2.用抗血清不纯化，或纯化程度太低的抗体包被，则阳性值较小，或没有阳性梯度。

　　3.封闭不好或标记物过浓可产生对照值较高。

　　制备并鉴定抗T-2毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株，以期为T-2毒素的快速检测提供有力的抗体工具。方法：采用琥珀酸酐法将T-2毒素活化为T-2HS,T-2HS在DCC与NHS作用下与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联合成*抗原。以T-2HS-BSA为抗原，免疫BALB/c小鼠，用ELISA筛选、建立分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株。测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价，用间接竞争法检测单克隆抗体细胞株的特异性。结果：建立了1株稳定分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞株T-1B3，该细胞株所分泌的单隆抗体Ig亚类为IgG1，ELISA检测结果表明抗T-2毒素抗体可以与T-2毒素发生特异性反应，工作浓度为1:6.5×104,IC50为3.6ng/ml。该抗体与HT-2毒素的交叉反应为65.9%,与黄曲霉毒素无交叉。结论：制备出能分泌具有较高特异性和亲和力的抗T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。